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1、該課題的第一個(gè)目的是為了摸索從有絲分裂的Hela細(xì)胞中、初步純化M期促進(jìn)因子(MeF)的合適方法,鑒定提取物、初步純化產(chǎn)物中MPF活性物質(zhì).本實(shí)驗(yàn)首先利用秋水仙胺使Hela細(xì)胞阻滯在有絲分裂的中期(M期),在不同培養(yǎng)基、不同培養(yǎng)時(shí)間的條件下,得到不同的有絲分裂中期指數(shù),及阻滯的中期指數(shù);結(jié)果表明,有絲分裂細(xì)胞的中期指數(shù)平均為94%,從而可以獲得較高的含M期促進(jìn)因子的蛋白含量.然后通過(guò)比較飽和硫酸銨溶液在不同pH值、及不同體積百分比的情況
2、下,沉淀分離蛋白質(zhì)溶液的效果,所得到的結(jié)果表明,飽和硫酸銨沉淀的平均回收率為23.94%.通過(guò)連續(xù)的Sephdex G-150、DNA-Cellulose柱層析,及高效液相色譜(HPLC)分離,得到由三個(gè)波峰組成的產(chǎn)物;最后利用Western Blotting,檢測(cè)到了提取物、初步純化產(chǎn)物中的MPF中Mr34KD的成分.初步純化產(chǎn)物的生物學(xué)活性在以后的實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步分析.第二個(gè)個(gè)目的,是為了分析Hela細(xì)胞MPF提取物促進(jìn)未成熟卵母細(xì)胞、
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