雷公藤多苷對痹證大鼠毒性反應初步評價.pdf

1、目的：
　　 以佐劑性關節(jié)炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠作為痹證動物模型,從血生化、病理學、免疫學以及代謝組的角度對雷公藤多苷引起痹證大鼠毒性反應進行初步評價。
　　 方法：
　　 選用雄性SD大鼠為實驗對象,采用右后足趾皮下注射弗氏完全佐劑的方法,誘導出AA模型40只。40只.AA模型大鼠和40只正常大鼠,按照體重分別隨機分為4組,每組10只:模型空白對照組、模型低劑量組、模型中劑量組、模

2、型高劑量組和正?？瞻讓φ战M、正常低劑量組、正常中劑量組和正常高劑量組?？瞻捉M給予生理鹽水；低、中、高三個劑量分別灌服雷公藤多苷為7mg/kg(等同于人臨床治療量)、70mg/kg、105mg/kg,每天一次。觀測動物體重及關節(jié)腫脹度等情況。給藥2周后處死動物,取血進行生化和血常規(guī)檢測,測量脾臟、胸腺、肝臟、腎臟、睪丸、附睪和前列腺重量,計算各臟器系數(shù),并在光鏡下觀察踝關節(jié)和臟器的病理損傷情況。采用流式技術(shù)檢測T淋巴細胞亞群變化。采用免疫

3、組化的方法觀察動物睪丸組織中內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、神經(jīng)型一氧化氮合成酶(nNOS)和誘導型一氧化氮合成酶(iNOS)表達的情況,采用比色法檢測大鼠血漿iNOS、總抗氧化能力(TAOC)指標變化,并采用代謝組學的方法檢測大鼠血漿中小分子代謝物質(zhì)的情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.踝關節(jié)腫脹度的測定結(jié)果顯示:
　　 模型組大鼠致炎側(cè)和繼發(fā)側(cè)踝關節(jié)腫脹度比正常組顯著增加；給藥后模型低劑量組大鼠踝關節(jié)腫脹程度與

4、模型組比較有降低趨勢。
　　 2.臟器系數(shù)的測定結(jié)果顯示:
　　 肝臟系數(shù)的變化,模型組表現(xiàn)為隨著劑量增大升高,正常組無明顯改變；睪丸系數(shù)的變化,正常與模型兩組均表現(xiàn)為隨著劑量增大而降低。脾臟、腎臟、附睪和前列腺系數(shù),不符合廣義線性模型,兩組無可比性。
　　 3.生化和血常規(guī)測定結(jié)果顯示:
　　 對于天門冬氨酸轉(zhuǎn)換酶(AST),正常組隨著劑量增加有增大的趨勢,模型組隨著劑量增加基本沒有變化；對于堿性磷酸酶

5、(ALP),隨著劑量的加大模型組有減小趨勢,而正常組則有增大趨勢。對于肌酐(CRE),不同組不同給藥劑量時對CRE影響不明顯。對于尿酸(UAC),不同組不同給藥劑量造成UAC存在差異,尤其是在中劑量時,正常組要明顯高于模型組；對于GLU,隨著劑量的加大模型組基本不變,而正常組則有增大趨勢。
　　 對于血紅蛋白(HGB)、紅細胞體積分布寬度(RDW)、淋巴細胞數(shù)(LY)和紅細胞平均體積(MCV),不同組不同給藥劑量時對這些指標影響

6、不明顯。對于血小板(PLT),不同組不同給藥劑量造成PLT存在差異,隨著劑量的加大正常組基本不變,而模型組則有增大趨勢。
　　 4.外周血T細胞亞群的檢測結(jié)果顯示:
　　 與模型組相比,正常組大鼠外周血中CD3存在差異——正常組隨著劑量增加有減小趨勢,模型組隨著劑量增加基本沒有變化。
　　 5.睪丸組織中iNOS、eNOS以及nNOS陽性細胞檢測:
　　 在低劑量時,正常組與模型組相比,無顯著性差異；中劑

7、量時,睪丸組織eNOS和nNOS指標表達模型組高于正常組,而iNOS表達則相反；高劑量時,eNOS和nNOS指標表達,二者表達均顯著性減少,而iNOS表達顯著性增加。
　　 6.血漿中iNOS和T-AOC的檢測結(jié)果:
　　 對于iNOS,不符合廣義線性模型,故正常和模型兩組無可比性；對于TAOC,正常組隨著劑量增加有增大趨勢,模型組隨著劑量增加基本沒有變化。
　　 7.代謝組檢測結(jié)果顯示:
　　 對于溶血

8、磷脂酰膽堿(LPC C16:0)和LPC C18:1,不同組不同給藥劑量時對二者影響均無明顯差異。對于熊去氧膽酸(UDCA)和鵝去氧膽酸(CDCA)兩者隨著劑量變化有下降趨勢。
　　 8.光鏡觀察結(jié)果顯示:
　　 關節(jié):與模型空白對照組相比,模型低劑量組關節(jié)的病理改變相對較輕。
　　 臟器:正常組大鼠肝臟未見異常,模型組大鼠出現(xiàn)病理改變。正常中、高劑量組和模型中、高劑量組均有腎臟病理改變,相同劑量下正常組較重。與

9、正常中劑量組相比,睪丸病理改變程度,模型中劑量組較輕；高劑量下兩組均有嚴重病理改變。
　　 結(jié)論
　　 1.雷公藤多苷治療劑量可以減輕AA大鼠踝關節(jié)腫脹程度,發(fā)揮其藥效作用。同時,其沒有表現(xiàn)出明顯毒性反應。
　　 2.雷公藤多苷在正常中劑量組,部分指標上表現(xiàn)出的毒性反應高于模型中劑量組。
　　 3.雷公藤多苷正常高劑量組和模型高劑量組均表現(xiàn)出嚴重毒性反應,提示雷公藤多苷超過一定劑量時,無論大鼠處于病理模型