雷公藤毒性相關(guān)的代謝研究.pdf

1、雷公藤是臨床上治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的常用中藥，近年研究表明雷公藤具有抗炎、免疫抑制、抗癌等活性，但由于嚴重的毒性反應使其應用受到極大限制。雷公藤的毒性作用機理較為復雜，本文從代謝角度對雷公藤主要成分的毒性作用和解毒過程進行探討，首先對雷公藤甲素和雷公藤內(nèi)酯酮在肝微粒體和大鼠（小鼠）體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化進行了研究，并在此基礎上初步闡明了雷公藤甲素藥物代謝與其毒性的相關(guān)性。
　　 1.雷公藤甲素和雷公藤內(nèi)酯酮的生物轉(zhuǎn)化研究
　　 本

2、文應用高分辨液質(zhì)聯(lián)用和在線氫氘交換技術(shù)對雷公藤兩種主要二萜內(nèi)酯類成分（雷公藤甲素和雷公藤內(nèi)酯酮）的體內(nèi)外代謝產(chǎn)物進行了鑒定。研究中采用了多種數(shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)后處理技術(shù)，包括子離子掃描、數(shù)據(jù)依賴的二級質(zhì)譜掃描、中性丟失過濾、提取離子流色譜、質(zhì)量虧損過濾技術(shù)等，通過一級、二級甚至三級質(zhì)譜數(shù)據(jù)對代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進行解析。結(jié)果表明液相色譜-高分辨多級質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及多種數(shù)據(jù)采集和后處理方法在藥物代謝物快速鑒定中具有很大優(yōu)勢，以上技術(shù)的聯(lián)合使用使得代謝產(chǎn)

3、物鑒定更加全面準確。另外，本章還對雷公藤甲素的主要反應性代謝產(chǎn)物進行了體外合成并用核磁共振技術(shù)確定結(jié)構(gòu)。
　　 對大鼠肝微粒體、人肝微粒體體外孵育樣本及大鼠尿液樣本進行分析，共檢測到雷公藤甲素Ⅰ相代謝產(chǎn)物38種，Ⅱ相代謝產(chǎn)物9種及反應性代謝產(chǎn)物21種;雷公藤內(nèi)酯酮Ⅰ相代謝產(chǎn)物47種，Ⅱ相代謝產(chǎn)物3種，反應性代謝產(chǎn)物28種。二者生物轉(zhuǎn)化途徑類似，Ⅰ相代謝途徑主要包括羥基化、環(huán)氧環(huán)開環(huán)和去氫，雷公藤內(nèi)酯酮還可轉(zhuǎn)化為雷公藤甲素;Ⅱ相代

4、謝途徑包括葡糖醛酸結(jié)合及硫酸結(jié)合;反應性代謝產(chǎn)物則主要是Ⅰ相代謝產(chǎn)物的谷胱甘肽結(jié)合物以及相應的水解產(chǎn)物。以上多數(shù)代謝產(chǎn)物均為首次報道。
　　 2.雷公藤甲素毒性與代謝的相關(guān)性研究
　　 本章建立了雷公藤甲素急性肝損傷的小鼠模型、抑制氧化代謝的小鼠模型及抑制谷胱甘肽合成的小鼠模型，并通過考察抑制氧化代謝及谷胱甘肽生成對雷公藤甲素毒性的影響，初步確定了雷公藤甲素毒性與其代謝的相關(guān)性。
　　 以小鼠死亡數(shù)量、血清ALT

5、、AST和ALP值及肝臟谷胱甘肽含量為觀察指標，考察雷公藤甲素1.2mg/kg對小鼠的毒性作用，繼而分別在氧化代謝酶活性和谷胱甘肽合成受到抑制的情況下給予雷公藤甲素，觀察毒性作用的變化。
　　 研究結(jié)果表明，抑制氧化代謝會導致雷公藤甲素的毒性、肝毒性均增強，說明雷公藤甲素的氧化代謝是解毒的過程;抑制谷胱甘肽的生成并不能加重雷公藤甲素的肝毒性，提示雷公藤甲素的肝毒性與谷胱甘肽消耗可能不相關(guān)。結(jié)果從代謝角度解釋了雷公藤甲素在小鼠體內(nèi)