枸杞多糖對雷公藤多苷致SD大鼠雄性生殖損傷的干預研究.pdf

1、目的：
　　研究枸杞多糖與雷公藤多苷含藥血清對SD大鼠睪丸細胞增殖率及SCF、C-kit、Caspase-3表達的影響；研究枸杞多糖對雷公藤多苷所致SD幼鼠雄性生殖損傷的干預途徑。
　　方法：
　　1.細胞培養(yǎng)將成年雄性SD大鼠隨機分為3組，分別給予雙蒸水0.5ml·100g-1(空白組)、雷公藤多苷片0.9mg·100g-1(GTW組)、枸杞多糖16mg·100g-1和雷公藤多苷片0.9mg·100g-1(混合藥物組

2、)每日1次灌胃，連續(xù)1周。于末次灌胃2h后麻醉，心臟采血，制備含藥血清。主要用胰蛋白酶和膠原酶二步消化法分離并提取10天內(nèi)新生SD大鼠睪丸細胞進行原代培養(yǎng)。將細胞分為4組，分別是空白組、GTW組、混合藥物組及FBS組，MTT法觀察相應含藥血清干預24h、48h后各組細胞增殖率，免疫細胞化學法檢測干預24h后各組細胞SCF、C-kit、Caspase-3表達。
　　2.動物實驗將3周齡雄性SD大鼠隨機分為3組，分別給予雙蒸水0.5m

3、l·100g-1(空白組)、雷公藤多苷片0.9mg·100g-1(GTW組)、枸杞多糖16mg·100g-1和雷公藤多苷片0.9mg·100g-1(混合藥物組)每日1次灌胃，連續(xù)8周。末次灌胃2h后，每組隨機各取8只大鼠，處死，摘取睪丸，Bouin液固定睪丸；光鏡下觀察睪丸組織形態(tài)學改變；免疫組織化學法檢測Bax、Bcl-2表達；原位末端標記法檢測生精細胞凋亡。將剩余所有大鼠分籠喂養(yǎng)，按照雌雄1：1比例配對，15天后取出雄性大鼠，繼續(xù)飼

4、養(yǎng)雌鼠至產(chǎn)仔，記錄配對雌鼠受孕、產(chǎn)仔情況。
　　結果：
　　1.細胞培養(yǎng)實驗結果
　　1.1細胞的生長增殖24h、48h各組活細胞反應的OD值組間比較均有顯著性差異(p<0.05)；混合藥物組OD值均顯著高于GTW組(p<0.05)，而與空白組比較，差異沒有統(tǒng)計學意義(p>0.05)。
　　1.2SCF的表達混合藥物組明顯高于GTW組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；GTW組明顯低于空白組、FBS組，差異比較有

5、統(tǒng)計學意義(p<0.05)；混合藥物組、空白組及FBS組三組比較，呈增高趨勢，沒有顯著的統(tǒng)計學差異(p>0.05)。
　　1.3C-kit的表達各組間比較差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；混合藥物組表達顯著高于GTW組、FBS組，差異比較有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，與空白組比較差異沒有統(tǒng)計學意義(p>0.05)。
　　1.4Caspase-3的表達各組間比較差異較顯著(p<0.05)；GTW組的表達明顯高于其它3組(p<0

6、.05)；混合藥物組與FBS組比較有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，與空白組比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。
　　2.動物實驗結果
　　2.1睪丸組織形態(tài)學改變光鏡下可見，與空白組比較，GTW組大鼠睪丸組織生精上皮變薄，生精細胞數(shù)量減少，排列紊亂，部分生精小管腔內(nèi)空虛，可見發(fā)育成熟的精子但排列紊亂，有較大的空隙；混合藥物組大鼠曲細精管內(nèi)各級生精細胞排列略稀疏，支持細胞胞質(zhì)略萎縮，可見發(fā)育成熟的精子。
　　2.2睪丸組

7、織Bax的表達各組間比較差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；GTW組的表達顯著高于其余兩組(p<0.05)；混合藥物組的表達較空白組顯著增高(p<0.05)。
　　2.3睪丸組織Bcl-2的表達各組間比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；表達強度從高到低依次為GTW組、混合藥物組、空白組。
　　2.4睪丸組織生精細胞凋亡各組間比較差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；空白組大鼠的睪丸組織內(nèi)僅有極少量生精細胞凋亡，為正常生理狀態(tài)

8、下凋亡的生精細胞；GTW組大鼠睪丸組織內(nèi)出現(xiàn)較多凋亡的生精細胞，表達強度顯著高于正常組(p<0.05)；混合藥物組同樣可以看到凋亡的生精細胞，表達強度上明顯低于GTW組(p<0.05)。
　　2.5生育力結果各組間比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)；空白組、GTW組雌鼠受孕率高于混合藥物組；平均產(chǎn)仔個數(shù)，GTW組較空白組減少，混合藥物組較GTW組增多。
　　結論：
　　1.雷公藤多苷對雄性有生殖損傷，推測其機制是通過