FGF9和維生素D對骨質(zhì)疏松癥作用的基礎(chǔ)和臨床研究.pdf

1、第一部分：FGF9對RANKL體外誘導破骨細胞分化的影響及其機制探討
　　目的：利用經(jīng)RANKL體外誘導的破骨細胞，觀察FGF9對破骨細胞分化的影響并探討其可能機制。
　　方法：利用RANKL誘導原代單核細胞法體外培養(yǎng)破骨細胞，細胞因子M-CSF、RANKL的濃度分別為30ng/ml，50ng/ml。采用兩種方法研究FGF9對破骨細胞的影響：（1）取4周齡FGF9WT/WT（WT）和FGF9WT/S99N（HE）小鼠各兩只，

2、利用RANKL誘導原代單核細胞法體外培養(yǎng)破骨細胞。（2）在誘導過程中分別加入不同濃度（10ng、20ng、50ng）的FGF9蛋白，將未加入FGF9蛋白的作為對照組。定期更換培養(yǎng)液及誘導因子和相應濃度的FGF9蛋白，直至破骨細胞分化成熟。行TRAP染色鑒定破骨細胞。倒置相差顯微鏡下觀察各組破骨細胞的形態(tài)并拍照。利用Image Pro Plus6.0軟件測量每視野破骨細胞數(shù)量，并利用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行分析和檢驗并繪制柱形圖。通過

3、Real-Time PCR技術(shù)檢測FGF9對破骨細胞分化相關(guān)基因Trap、Mmp9、Ctsk表達量的影響。
　　結(jié)果：（1）鏡下觀察可見WT組和HE組，10ng、20ng、50ng組和對照組均有形態(tài)不規(guī)則、多核的TRAP染色陽性的破骨細胞生成，實驗組（10ng、20ng、50ng組）與對照組相比，生成的TRAP染色陽性的破骨細胞體積更大，數(shù)量更多，胞漿更為伸展。統(tǒng)計分析后顯示，WT組的破骨細胞多于HE組，且差異具有統(tǒng)計學意義（P＜

4、0.05）；20ng組生成的破骨細胞數(shù)目最多，10ng次之，對照組生成的破骨細胞數(shù)目最少，實驗組各組與對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（分別為P＜0.05，P＜0.005，P＜0.05）。（2）破骨細胞分化相關(guān)基因（Trap、Mmp9、Ctsk）mRNA表達水平在兩組間比較顯示，與WT組相比，Trap和Mmp9 mRNA表達水平在HE組均明顯下調(diào)（P＜0.05，P＜0.001）。
　　結(jié)論：成纖維細胞生長因子9（FGF9）可促進破骨

5、前體細胞向破骨細胞的分化，并且其促進作用與濃度無相關(guān)性。其作用機制可能通過影響破骨細胞分化相關(guān)基因Trap和Mmp9的轉(zhuǎn)錄水平進而影響破骨細胞的分化。
　　第二部分：老年男性血清維生素D與甲狀旁腺激素及骨代謝指標的相關(guān)性研究
　　目的：探討老年男性血清維生素D水平，及其與甲狀旁腺激素及骨代謝指標的相關(guān)性。
　　方法：收集2010年9月至2013年9月在上海瑞金醫(yī)院老年病科病房住院及門診患者895例，平均年齡為76歲。測

6、定其血清25-羥基維生素D[25-(OH)D]、血鈣（Ca）、血磷（P）、甲狀旁腺激素（PTH），I型原膠原分子N-端前肽（PINP）及β-I型膠原C端肽（β-CTX）水平。根據(jù)血清25-(OH)D水平將患者分為維生素D嚴重缺乏組（＜25nmol/L），維生素D缺乏組（25-50 nmol/L），維生素D不足組（50-75 nmol/L）和維生素D充足組（＞75 nmol/L）。
　　結(jié)果：（1）895例老年男性患者年齡60～99

7、歲，平均年齡76歲。血清25-(OH)D平均值為（43.52±21.97）nmol/L。維生素D缺乏者（≤50nmol/L）為592位（67％）；維生素D不足者（50-75 nmol/L）為223人（25%）；維生素D缺乏或不足者高達92%；維生素D充足者（＞75 nmol/L）僅為80人（8%）。（2）不同年齡段血清25-(OH)D的比較顯示，血清25-(OH)D水平隨增齡而逐漸降低。60～69歲組25-(OH)D值最高，為（46.2

8、7±20.76）nmol/L，與其它各組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。相關(guān)分析表明，血清25-(OH)D與年齡呈負相關(guān)（相關(guān)系數(shù)r=-0.088，P=0.008）。（3）甲狀旁腺素（PTH）的平均水平為（55.74±29.06）pg/ml。相關(guān)分析顯示，25-(OH)D與PTH、PINP、β-CTX均呈負相關(guān)（r值分別為：—0.209，-0.109，-0.122，P均＜0.05）。血25-(OH)D與Ca呈正相關(guān)（r=0.20