FGF9和維生素D對(duì)骨質(zhì)疏松癥作用的基礎(chǔ)和臨床研究.pdf

1、第一部分：FGF9對(duì)RANKL體外誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化的影響及其機(jī)制探討
　　目的：利用經(jīng)RANKL體外誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞，觀察FGF9對(duì)破骨細(xì)胞分化的影響并探討其可能機(jī)制。
　　方法：利用RANKL誘導(dǎo)原代單核細(xì)胞法體外培養(yǎng)破骨細(xì)胞，細(xì)胞因子M-CSF、RANKL的濃度分別為30ng/ml，50ng/ml。采用兩種方法研究FGF9對(duì)破骨細(xì)胞的影響：（1）取4周齡FGF9WT/WT（WT）和FGF9WT/S99N（HE）小鼠各兩只，

2、利用RANKL誘導(dǎo)原代單核細(xì)胞法體外培養(yǎng)破骨細(xì)胞。（2）在誘導(dǎo)過(guò)程中分別加入不同濃度（10ng、20ng、50ng）的FGF9蛋白，將未加入FGF9蛋白的作為對(duì)照組。定期更換培養(yǎng)液及誘導(dǎo)因子和相應(yīng)濃度的FGF9蛋白，直至破骨細(xì)胞分化成熟。行TRAP染色鑒定破骨細(xì)胞。倒置相差顯微鏡下觀察各組破骨細(xì)胞的形態(tài)并拍照。利用Image Pro Plus6.0軟件測(cè)量每視野破骨細(xì)胞數(shù)量，并利用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析和檢驗(yàn)并繪制柱形圖。通過(guò)

3、Real-Time PCR技術(shù)檢測(cè)FGF9對(duì)破骨細(xì)胞分化相關(guān)基因Trap、Mmp9、Ctsk表達(dá)量的影響。
　　結(jié)果：（1）鏡下觀察可見(jiàn)WT組和HE組，10ng、20ng、50ng組和對(duì)照組均有形態(tài)不規(guī)則、多核的TRAP染色陽(yáng)性的破骨細(xì)胞生成，實(shí)驗(yàn)組（10ng、20ng、50ng組）與對(duì)照組相比，生成的TRAP染色陽(yáng)性的破骨細(xì)胞體積更大，數(shù)量更多，胞漿更為伸展。統(tǒng)計(jì)分析后顯示，WT組的破骨細(xì)胞多于HE組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜

4、0.05）；20ng組生成的破骨細(xì)胞數(shù)目最多，10ng次之，對(duì)照組生成的破骨細(xì)胞數(shù)目最少，實(shí)驗(yàn)組各組與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為P＜0.05，P＜0.005，P＜0.05）。（2）破骨細(xì)胞分化相關(guān)基因（Trap、Mmp9、Ctsk）mRNA表達(dá)水平在兩組間比較顯示，與WT組相比，Trap和Mmp9 mRNA表達(dá)水平在HE組均明顯下調(diào)（P＜0.05，P＜0.001）。
　　結(jié)論：成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9（FGF9）可促進(jìn)破骨

5、前體細(xì)胞向破骨細(xì)胞的分化，并且其促進(jìn)作用與濃度無(wú)相關(guān)性。其作用機(jī)制可能通過(guò)影響破骨細(xì)胞分化相關(guān)基因Trap和Mmp9的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)而影響破骨細(xì)胞的分化。
　　第二部分：老年男性血清維生素D與甲狀旁腺激素及骨代謝指標(biāo)的相關(guān)性研究
　　目的：探討老年男性血清維生素D水平，及其與甲狀旁腺激素及骨代謝指標(biāo)的相關(guān)性。
　　方法：收集2010年9月至2013年9月在上海瑞金醫(yī)院老年病科病房住院及門診患者895例，平均年齡為76歲。測(cè)

6、定其血清25-羥基維生素D[25-(OH)D]、血鈣（Ca）、血磷（P）、甲狀旁腺激素（PTH），I型原膠原分子N-端前肽（PINP）及β-I型膠原C端肽（β-CTX）水平。根據(jù)血清25-(OH)D水平將患者分為維生素D嚴(yán)重缺乏組（＜25nmol/L），維生素D缺乏組（25-50 nmol/L），維生素D不足組（50-75 nmol/L）和維生素D充足組（＞75 nmol/L）。
　　結(jié)果：（1）895例老年男性患者年齡60～99

7、歲，平均年齡76歲。血清25-(OH)D平均值為（43.52±21.97）nmol/L。維生素D缺乏者（≤50nmol/L）為592位（67％）；維生素D不足者（50-75 nmol/L）為223人（25%）；維生素D缺乏或不足者高達(dá)92%；維生素D充足者（＞75 nmol/L）僅為80人（8%）。（2）不同年齡段血清25-(OH)D的比較顯示，血清25-(OH)D水平隨增齡而逐漸降低。60～69歲組25-(OH)D值最高，為（46.2

8、7±20.76）nmol/L，與其它各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。相關(guān)分析表明，血清25-(OH)D與年齡呈負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)r=-0.088，P=0.008）。（3）甲狀旁腺素（PTH）的平均水平為（55.74±29.06）pg/ml。相關(guān)分析顯示，25-(OH)D與PTH、PINP、β-CTX均呈負(fù)相關(guān)（r值分別為：—0.209，-0.109，-0.122，P均＜0.05）。血25-(OH)D與Ca呈正相關(guān)（r=0.20