miR-1934在改善脂肪組織炎癥中的作用研究.pdf

1、第一部分 miR-1934在肥胖小鼠與肥胖人體內(nèi)的表達(dá)研究
　　目的：脂肪組織慢性炎癥是肥胖相關(guān)代謝性疾病的共同基礎(chǔ)，與胰島素抵抗等多種代謝性疾病密切相關(guān)。近年來，研究顯示多種microRNAs在肥胖人群中的表達(dá)出現(xiàn)異常，其中部分與脂肪組織炎癥密切相關(guān)。課題組前期研究中發(fā)現(xiàn)抗炎因子脂聯(lián)素特異性調(diào)控的microRNA，即 miR-1934，本部分研究擬探討miR-1934在肥胖小鼠與肥胖人體內(nèi)的表達(dá)情況。
　　方法：（1）高脂

2、飲食喂養(yǎng) C57L/6J小鼠8周構(gòu)建肥胖小鼠模型，檢測(cè)小鼠血清代謝相關(guān)指標(biāo)，熒光定量PCR檢測(cè)脂肪組織中炎癥因子與miR-1934的表達(dá)情況。（2）收集21名正常與14名肥胖者網(wǎng)膜脂肪組織，檢測(cè)脂肪組織中炎癥因子的表達(dá)水平，同時(shí)檢測(cè)miR-1934的表達(dá)情況。（3）收集25名正常與24名肥胖者血清，檢測(cè)血清中代謝與炎癥相關(guān)指標(biāo)，同時(shí)檢測(cè)血清中 miR-1934的表達(dá)情況，并對(duì)血清miR-1934水平與臨床相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)性分析。

3、　　結(jié)果：（1）與正常對(duì)照組相比，高脂飲食喂養(yǎng)的肥胖組小鼠體重與脂肪/體重顯著增加，同時(shí)血糖、血清甘油三酯與胰島素水平亦顯著增加，提示肥胖小鼠模型構(gòu)建成功，且小鼠存在明顯的代謝紊亂；（2）肥胖小鼠脂肪組織中促炎細(xì)胞因子白介素-6（IL-6）、巨噬細(xì)胞趨化因子-1（MCP-1）與CD-11c的表達(dá)水平顯著增加，抗炎細(xì)胞因子脂聯(lián)素（Adiponectin, ApN）顯著降低，提示肥胖小鼠脂肪組織中存在明顯的炎癥狀態(tài)；同時(shí)，肥胖小鼠脂肪組織中

4、miR-1934的表達(dá)明顯低于對(duì)照組。（3）肥胖人脂肪組織中炎癥因子IL-6、腫瘤壞死因子（TNF-α）表達(dá)增加，而抗炎因子白介素-10（IL-10）與 ApN表達(dá)降低，提示肥胖患者脂肪組織中存在明顯的炎癥狀態(tài)；同時(shí)，miR-1934在肥胖者脂肪組織中的表達(dá)顯著降低。（4）與對(duì)照者相比，肥胖人收縮壓（SBP）、舒張壓（DBP）、甘油三酯（TG）、糖化血紅蛋白（HbAlc）、空腹血糖（FPG）、餐后2小時(shí)血糖（2hPG）、空腹胰島素（FI

5、NS）、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）及超敏 C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）水平增加，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-c）、胰島素敏感性指數(shù)（HOMA-IS）與 ApN水平顯著降低，提示肥胖者體內(nèi)存在明顯的代謝紊亂及炎癥狀態(tài)；（5） miR-1934在肥胖者血清中的水平顯著低于正常者，且血清 miR-1934與BMI、WC、FINS、HOMA-IR、LDL-c以及hs-CRP呈顯著負(fù)相關(guān)，與HOMA-IS呈顯著正相關(guān)。
　　結(jié)論：miR

6、-1934在肥胖小鼠及肥胖人脂肪組織顯著降低，提示脂肪組織中miR-1934的表達(dá)與脂肪組織炎癥狀態(tài)可能存在著密切關(guān)系。肥胖人血清miR-1934水平亦顯著低于正常者，且與肥胖及炎癥相關(guān)臨床指標(biāo)存在顯著相關(guān)性，提示血清miR-1934可能作為潛在的生物標(biāo)志物，為肥胖相關(guān)代謝性疾病提供新的診療靶點(diǎn)。
　　第二部分 miR-1934在改善脂肪組織炎癥中的作用研究
　　目的：近年來，研究顯示microRNAs在肥胖誘導(dǎo)的脂肪組織炎

7、癥中具有重要作用。課題組前期研究提示miR-1934是抗炎因子脂聯(lián)素的靶 microRNAs，其很可能如同脂聯(lián)素一樣，具有抗炎作用。因此，本部分研究擬探討miR-1934在改善脂肪組織炎癥中的作用。
　　方法：（1）體外實(shí)驗(yàn)：利用 TNF-α（50ng/ml）干預(yù)前3T3-L1與成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞24小時(shí)，以模擬體內(nèi)脂肪組織炎癥狀態(tài)，熒光定量 PCR檢測(cè)細(xì)胞中 miR-1934的表達(dá)情況；在上述兩種炎性脂肪細(xì)胞中過表達(dá) mi

8、R-1934，觀察細(xì)胞中炎癥細(xì)胞因子 IL-6與 MCP-1的mRNA與蛋白水平改善情況。（2）體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：分別利用連接有陰性對(duì)照與miR-1934 mimic序列的慢病毒轉(zhuǎn)染至3T3-L1前脂肪細(xì)胞中，收集一定數(shù)量的兩種細(xì)胞，分別皮下注入裸鼠背部的左右兩側(cè)，高脂喂養(yǎng)裸鼠4周，檢測(cè)裸鼠背部生長(zhǎng)出的脂肪組織塊中miR-1934與炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：（1）體外試驗(yàn)中，TNF-α分別干預(yù)3T3-L1前脂肪細(xì)胞與成熟脂肪細(xì)胞

9、后，細(xì)胞中炎癥因子IL-6與MCP-1的mRNA水平顯著增加，提示TNF-α干預(yù)構(gòu)建的炎性脂肪細(xì)胞模型成功；在上述炎性脂肪細(xì)胞中miR-1934的表達(dá)顯著降低，與肥胖動(dòng)物和人體內(nèi)觀察到的結(jié)果一致。進(jìn)一步在上述細(xì)胞模型中觀察到，過表達(dá)miR-1934能顯著降低脂肪細(xì)胞中的炎癥細(xì)胞因子IL-6與MCP-1的mRNA以及蛋白水平。（2）體內(nèi)試驗(yàn)中，裸鼠體內(nèi)過表達(dá)miR-1934的脂肪組織塊中，促炎細(xì)胞因子IL-6、IL-1β與TNF-α mR