血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑對(duì)脂肪組織和脂肪細(xì)胞糖脂代謝及炎癥因子的影響.pdf

1、高血壓、糖尿病、脂質(zhì)代謝紊亂和肥胖常常簇集出現(xiàn)而形成代謝綜合征，嚴(yán)重影響到公眾的健康水平。脂肪細(xì)胞可以產(chǎn)生和分泌促炎因子如TNFα、IL-1β和IL-6，很多肥胖相關(guān)的疾病狀態(tài)與這些促炎因子等的不適當(dāng)分泌有關(guān)。
　　 高血壓和肥胖患者患2型糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)增加。近期臨床試驗(yàn)表明，阻斷腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)可能對(duì)這一高風(fēng)險(xiǎn)人群具有一定的保護(hù)作用。RAS系統(tǒng)組分存在于脂肪組織和脂肪細(xì)胞，因此脂肪組織和細(xì)胞可能成為血管緊張素受體拮

2、抗劑(ARBs)的作用靶點(diǎn)。
　　 基于以上背景，本研究通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究ARBs對(duì)于脂肪組織和細(xì)胞本身糖脂代謝以及分泌炎癥因子的影響，并對(duì)作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討。
　　 目的:觀察血管緊張素II受體拮抗劑(Angiotensin II type1 receptorblockers，ARBs)對(duì)于脂肪組織和細(xì)胞糖脂代謝以及分泌炎癥因子的影響以探討ARBs改善胰島素抵抗的機(jī)制。
　　 方法：
　　

3、1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：以Wistar雄性大鼠為研究對(duì)象，應(yīng)用坎地沙坦酯(Candesartan，8mg/kg·d)對(duì)高脂飼養(yǎng)的Wistar大鼠進(jìn)行為期4周的干預(yù)，用正葡萄糖鉗夾試驗(yàn)比較干預(yù)組(高脂+坎地沙坦組，HF+C組)和非干預(yù)組(單純高脂，HF組)的胰島素敏感性，同時(shí)留取血清檢測(cè)各組動(dòng)物血糖、血脂、胰島素以及促炎因子IL-1β、IL-6和TNFα的水平，并對(duì)干預(yù)后各組體重、腎周和附睪脂肪組織含量進(jìn)行檢測(cè)；
　　 2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：以3T

4、3-L1細(xì)胞株為研究對(duì)象，1)MTT法檢測(cè)不同濃度Telmisartan對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖的影響。2)應(yīng)用替米沙坦(Telmisartan)以及聯(lián)合PPARγ拮抗劑GW9662對(duì)3T3-L1細(xì)胞分化的早期(分化開(kāi)始12h，24h)進(jìn)行干預(yù)，倒置顯微鏡下以及油紅0染色定量分析Telmisartan對(duì)于前脂肪細(xì)胞分化和分化過(guò)程中成脂作用的可能影響以及應(yīng)用Q-PCR(Realtime QuantitativePCR)檢測(cè)Telmis

5、artan干預(yù)下3T3-L1分化過(guò)程中的PPAR Y mRNA表達(dá)情況；3)應(yīng)用不同濃度Telmisartan(0.01-10 ug/ml)處理誘導(dǎo)成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，通過(guò)檢測(cè)脂肪細(xì)胞18F-FDG攝取、培養(yǎng)液中游離脂肪酸(FFA)、IL-1β、IL-6和TNFα，觀察Telmisartan對(duì)于成熟脂肪細(xì)胞糖脂代謝以及炎癥因子分泌的影響；4)為進(jìn)一步明確機(jī)制，利用高通量的基因表達(dá)譜芯片對(duì)替米沙坦引起的3T3-L1脂肪細(xì)胞差異基因

6、表達(dá)進(jìn)行篩選和分析，篩選的部分基因由Q-PCR進(jìn)行驗(yàn)證。
　　 結(jié)果：
　　 1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1)Candesartan干預(yù)的高脂喂養(yǎng)大鼠(HF+C)組體重、腎周和附睪脂肪量均較HF組顯著降低(體重478±35g vs518±28g，P<0.01；腎周脂肪20±4g vs26±4g，P<0.01；附睪脂肪9.6±1.8g vs11.5±2.Og，P<0.05)，空腹血糖差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；2)HF+C組血

7、漿炎癥因子IL-6、TNFα水平較HF組也顯著降低(IL-6分別為54.03±13.32pg/ml和85.35±16.93pg/ml，P<0.05； TNFα分別為33.18±5.51pg/ml和48.20±7.87g/ml，P<0.05)，IL-1β在HF組和HF+C組差異無(wú)顯著意義(41.04±10.12pg/ml vs29.72±7.66 pg/ml，P>0.05)；3)正葡萄糖鉗夾試驗(yàn)表明，兩組的葡萄糖輸注率(GIR)存在顯著差

8、異，HF+C組GIR顯著高于HF組(22.4±5.12mg/kg·min vs13.54±3.92 mg/kg·min，P<0.05)；
　　 2.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：1)MTT法檢測(cè)表明，濃度為0.01-1.0 ug/ml的Telmisartan對(duì)于3T3-L1前脂肪細(xì)胞的增殖無(wú)顯著影響；2)3T3-L1細(xì)胞的分化的早期(誘導(dǎo)起始12h和24h)應(yīng)用Telmisartan(0.1ug/ml)干預(yù)可以促進(jìn)細(xì)胞的分化以及分化過(guò)程中的

9、脂質(zhì)聚集，同時(shí)Realtime PCR顯示Telmisartan可增加誘導(dǎo)過(guò)程中PPARγ基因的表達(dá)增高(在誘導(dǎo)的第3天和第6天分別增加2.51倍和1.46倍)；3)對(duì)誘導(dǎo)成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，Telmisartan可以呈劑量依賴(lài)的降低細(xì)胞脂質(zhì)含量，增加18F-FDG攝取。同時(shí)，Telmisartan可以降低培養(yǎng)液中IL-6和TNFα的分泌，增加培養(yǎng)液中FFA的含量?；蛐酒Y(jié)果篩選157個(gè)差異表達(dá)基因或基因片段。這些基因涉

10、及細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞的分化以及氧化應(yīng)激和炎性途徑，這些途徑介導(dǎo)了Telmisartan發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞脂質(zhì)代謝和炎癥因子分泌的作用。另外，Nos3(內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因)和CPTIA(肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶-1α基因)基因表達(dá)的改變可能介導(dǎo)了Telmisartan發(fā)揮調(diào)節(jié)細(xì)胞糖脂代謝的作用。
　　 結(jié)論：
　　 1)Candesartan可以減少高脂喂養(yǎng)大鼠的體重和脂肪組織，降低血清炎癥因子水平，改善大鼠糖、脂代謝；