ESAT-6與CFP-10在結(jié)核性腦膜炎患者的腦脊髓液中的表達(dá).pdf

1、目的：結(jié)核性腦膜炎(Tuberculous meningitis，TBM)簡(jiǎn)稱結(jié)腦，是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染蛛網(wǎng)膜下腔引起的腦膜、脊髓膜的一種非化膿性炎癥性疾病。TBM的死亡率和致殘率很高，是結(jié)核病中最嚴(yán)重的一種類型，快速有效的診斷和早期治療是減少病死率和致殘率的關(guān)鍵。結(jié)腦的早期、準(zhǔn)確的診斷一直是一個(gè)世界性難題，找到MTB存在于蛛網(wǎng)膜下腔的證據(jù)是診斷結(jié)腦的關(guān)鍵，利用免疫學(xué)方法檢

2、測(cè)腦脊液中的MTB特異性抗原可以證明MTB的存在。結(jié)核分枝桿菌早期分泌抗原靶6(6kD early secretory antigenic target，ESAT-6)和濾液培養(yǎng)蛋白10(culture filtrate protein10，CFP-10)是MTB的兩種特異性抗原，被認(rèn)為是結(jié)腦診斷最有希望的兩種抗原。本實(shí)驗(yàn)將應(yīng)用ELISA和免疫細(xì)胞化學(xué)染色法對(duì)TBM患者腦脊液中的ESAT-6和CFP-10進(jìn)行定量定性分析以及細(xì)胞定位研究

3、，以期為TBM的臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室研究提供依據(jù)。
　　方法：收集臨床懷疑為TBM患者的病歷資料，根據(jù)最新診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，篩選出30例“確診TBM”和“很可能TBM”為病例組(結(jié)腦組)，20例非結(jié)核性腦膜炎患者(非結(jié)腦組)為對(duì)照組。結(jié)腦組所有患者抗癆治療前、治療1～2周后，非結(jié)腦患者入院后分別行腰椎穿刺術(shù)，留取腦脊液。對(duì)結(jié)腦組以及非結(jié)腦組(共80份)腦脊液的全部常規(guī)、生化檢查結(jié)果進(jìn)行記錄并分析。應(yīng)用ELISA雙抗體夾心法分別檢測(cè)80

4、份腦脊液中ESAT-6及CFP-10抗原，對(duì)抗原濃度進(jìn)行分析。用離心沉淀法收集結(jié)腦組和非結(jié)腦組首次腰穿的腦脊液細(xì)胞子玻片上，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)腦脊液細(xì)胞內(nèi)的兩種抗原，記錄并分析結(jié)果。
　　結(jié)果：
　　1臨床資料分析結(jié)果：符合入組標(biāo)準(zhǔn)的TBM患者30例，確診TBM5例，很可能TBM25例，其中男性16例，女性14例，年齡8個(gè)月～60歲，平均為34.39±2.76歲。對(duì)照組為其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病，共20例，男12例，女8例，年

5、齡4～67歲，平均為30.64±4.27歲。結(jié)腦組與正常組相比，腦脊液壓力、腦脊液中的總細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、蛋白含量均升高，葡萄糖、氯化物含量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)腦組治療前后腦脊液常規(guī)生化分析比較，腦脊液壓力、總細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、蛋白含量均有所降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而葡萄糖、氯化物含量差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2腦脊液中ESAT-6抗原測(cè)定：結(jié)腦組60份腦脊液，經(jīng)ELISA

6、法檢測(cè)，ESAT-6水平為(26.38～39.68)pg/ml，含量平均值為33.03±3.32pg/ml；對(duì)照組中ESAT-6水平為(0.00～1.47)pg/ml，含量平均值為0.05±0.87pg/ml，與0比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較有明顯差異(P<0.05)。結(jié)腦組患者治療前腦脊液中ESAT-6水平為(33.37～53.42)pg/ml，平均值為43.40±4.90pg/ml，治療1～2周后腦脊液中

7、ESAT-6水平為(15.14～30.18)pg/ml，平均值為22.66±3.68pg/ml，前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3腦脊液中CFP-10抗原測(cè)定：結(jié)腦組腦脊液中CFP-10水平為(181.18～244.67)pg/ml，含量平均值為212.93±15.86pg/ml；對(duì)照組CFP-10水平為(7.59～35.99)pg/ml，含量平均值為9.73±32.63pg/ml，二者比較有明顯差異(P<0.05

8、)。治療前腦脊液中CFP-10水平為(204.61～300.68)pg/ml平均值為252.64±23.49pg/ml，治療1～2周后腦脊液中CFP-10水平為(134.21～212.22)pg/ml，平均值為173.21±19.07pg/ml，前后比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4腦脊液細(xì)胞內(nèi)ESAT-6和CFP-10抗原的檢測(cè)：結(jié)腦組30例，經(jīng)ESAT-6免疫細(xì)胞化學(xué)染色有22例陽(yáng)性，對(duì)照組20例中有2例陽(yáng)性。敏感

9、性為73.33%，特異性為90.00%；CFP-10免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)腦組有26例陽(yáng)性，對(duì)照組中有1例陽(yáng)性，敏感性為86.67%，特異性為95.00%。
　　5 ESAT-6及CFP-10抗原聯(lián)合檢測(cè)的比較：利用上述4中結(jié)果，將檢測(cè)兩種抗原的敏感性和特異性分別進(jìn)行X2檢驗(yàn)，敏感性P<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；特異性P>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，兩種方法聯(lián)合檢測(cè)的敏感性大于單一抗原的檢測(cè)。
　　結(jié)論：ESAT-6與C