結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液結(jié)核桿菌培養(yǎng)機(jī)制中的初步研究.pdf

1、背景：
　　結(jié)核性腦膜炎（tuberculous meningitis，TBM）是最常見的致死性肺外結(jié)核之一，在結(jié)核病中的發(fā)病率為10％-20％，死亡率為15％-30％，致殘率和致死率高。其預(yù)后與早期診斷從而早期治療有密切關(guān)系。結(jié)核性腦膜腦炎的診斷目前大多數(shù)依賴于臨床表現(xiàn)和影像學(xué)檢查，由于臨床表現(xiàn)不具有典型特診，基本上無法確診。目前最常用的針對(duì)結(jié)核病的主要診斷手段有以下幾種：腦組織活檢、病毒分離、聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase

2、 chain reaction，PCR）、免疫學(xué)試驗(yàn)、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、抗酸染色等。但他們具有共同的缺陷：方法靈敏度低，缺乏特異性，耗費(fèi)較高，耗時(shí)較長，很難被臨床一線應(yīng)用。腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查作為神經(jīng)內(nèi)科的一項(xiàng)常規(guī)檢查，因其設(shè)備要求低，價(jià)格合理，操作流程簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，對(duì)結(jié)核性腦膜炎的診斷具有重要輔助意義。對(duì)確診結(jié)核性腦膜炎的患者腦脊液細(xì)胞學(xué)進(jìn)行分析有助于提高對(duì)腦脊液細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)核性腦膜炎的認(rèn)識(shí)。但是由于傳統(tǒng)腦脊液抗酸染色和結(jié)核桿菌培養(yǎng)的陽

3、性率較低，因此既往進(jìn)行腦脊液細(xì)胞學(xué)研究的結(jié)核性腦膜炎患者主要依賴臨床診斷和對(duì)結(jié)核藥物的反應(yīng)性作為參考診斷標(biāo)準(zhǔn)，從而難以對(duì)腦脊液細(xì)胞學(xué)的診斷意義進(jìn)行明確評(píng)估。
　　Bactec MGIT960系統(tǒng)是新近發(fā)明的結(jié)核桿菌快速培養(yǎng)方法，是結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)、鑒定和一線藥敏試驗(yàn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，與傳統(tǒng)羅氏（L-J）培養(yǎng)法比較，更為敏感且培養(yǎng)時(shí)間更短，成為目前臨床最有效的結(jié)核確診方法之一。使用Bactec MGIT960系統(tǒng)對(duì)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)可以

4、明顯提高確診結(jié)核性腦膜炎的比例。本課題收集了2010年9月至2011年12月陜西省23家醫(yī)院送往第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院檢驗(yàn)科細(xì)菌室使用Bactec MGIT960系統(tǒng)腦脊液結(jié)核桿菌培養(yǎng)陽性并于神經(jīng)內(nèi)科腦脊液細(xì)胞學(xué)室行腦脊液檢查的37例患者的臨床資料，對(duì)其腦脊液細(xì)胞學(xué)及傳統(tǒng)和改良抗酸染色檢查結(jié)果加以分析，研究腦脊液細(xì)胞學(xué)診斷結(jié)核性腦膜炎的臨床意義。
　　方法：
　　1. Bactec MGIT960結(jié)核培養(yǎng)
　　Bacte

5、c MGIT960全自動(dòng)分枝桿菌培養(yǎng)／藥敏系統(tǒng)由美國BD公司生產(chǎn)。將腦脊液按照MGITTM Procedure Manual要求進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)結(jié)果通過PCR進(jìn)行確定。
　　2.腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)方法
　　留取新鮮腦脊液標(biāo)本，根據(jù)不同細(xì)胞數(shù)，取100-500μ1腦脊液，采用以我科老前輩粟秀初教授研發(fā)的FMU-5為基礎(chǔ)而進(jìn)一步改進(jìn)的FMU-6微型細(xì)胞玻片離心沉淀器進(jìn)行（500轉(zhuǎn)／分），低速離心，時(shí)間一般控制在2-5 min，然后應(yīng)

6、用May-Grunwald Giemsa（MGG）染色將收集有細(xì)胞的玻片進(jìn)行染色，約待干燥后，應(yīng)用光學(xué)顯微鏡，調(diào)整在油鏡下進(jìn)行細(xì)胞學(xué)計(jì)數(shù)和分類。
　　3.改良抗酸染色
　　留取新鮮腦脊液標(biāo)本，加到用多聚賴氨酸處理過的玻片上，離心沉淀1000g，5-10min；4%多聚甲醛固定（PH7.4）10min，室溫；0.3%TritonX-100浸泡30min；再用含有0.3%TritonX-100石炭酸復(fù)紅染料染色15min，酸性酒

7、精脫色，美藍(lán)復(fù)染5min，顯微鏡下觀察。
　　結(jié)果:
　　Bactec MGIT960系統(tǒng)顯著增加了結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性率，確診結(jié)核性腦膜炎患者的腦脊液細(xì)胞呈混合細(xì)胞反應(yīng)是典型的腦脊液細(xì)胞學(xué)特征，其中多數(shù)患者（約60%）表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞為主型，也有1/3左右為中性粒細(xì)胞為主。發(fā)病后1周確診的結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液白細(xì)胞總數(shù)最高，而在其后時(shí)間點(diǎn)確診的結(jié)核性腦膜炎患者腦脊液白細(xì)胞數(shù)大致相當(dāng)。在確診結(jié)核性腦膜炎

8、患者的腦脊液內(nèi)存在著漿細(xì)胞，并且在三周以后明顯增高。這可能提示結(jié)核性腦膜炎慢性轉(zhuǎn)換的過程。37例確診結(jié)核性腦膜炎患者，傳統(tǒng)抗酸染色8例陽性，而改良抗酸染色37例陽性。對(duì)于8例傳統(tǒng)和改良抗酸均為陽性的患者，改良抗酸染色處理腦脊液的抗酸桿菌陽性視野數(shù)高于傳統(tǒng)抗酸染色。且改良抗酸染色處理后，除了見到細(xì)胞外游離的結(jié)核分枝桿菌以外，還在中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到結(jié)核分枝桿菌的存在。隨著結(jié)核培養(yǎng)和抗酸染色方法的改進(jìn)，越來越多的結(jié)核性腦膜