小鼠血吸蟲病肝組織中內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1的表達(dá)及黃芪總苷對其影響.pdf

1、目的：研究內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1(endothelial cell specific molecule-1，ESM-1)在小鼠正常肝組織及血吸蟲病肝組織中不同時期的表達(dá)、分布及其作用，并且觀祭黃芪總苷(astrogalosides，AST)對血吸蟲病肝組織中病理形態(tài)學(xué)變化及ESM-1表達(dá)的影響。 方法：將釘螺孵育后逸出的中國大陸株日本血吸蟲尾蚴，以蓋玻片法經(jīng)小鼠腹部皮膚攻擊感染，總計感染120只ICR.小鼠，每只小鼠感染30

2、1條日本血吸蟲尾蚴。實(shí)驗(yàn)小鼠造模35d后隨機(jī)分為AST高劑量(20mg/kg.d)組、AST。低劑量(10mg/kg.d)組、陽性藥(護(hù)肝片，540mg/kg.d)組、模型組，每組30只，灌胃給藥1次/d。實(shí)驗(yàn)小鼠均于感染血吸蟲尾蚴40d后以吡喹酮(500mg/kg.d)治療2 d，藥物均以5g/L羧甲基纖維素鈉為溶媒，10 ml/kg-d灌胃。正常對照組為30只健康鼠。模型組和正常組均以等量5 g/L羧甲基纖維素鈉灌胃。分別于感染后第

3、6、lO、14wk末每組隨機(jī)處死lO只小鼠，取肝臟組織作常規(guī)病理學(xué)檢查，并制作組織芯片；應(yīng)用HE和天狼猩紅染色法觀察小鼠蟲卵結(jié)節(jié)大小及纖維化程度；采用免疫組織化學(xué)和原位分子雜交技術(shù)檢測ESM-1 mRNA及蛋白，免疫組織化學(xué)染色結(jié)果以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)明顯黃色或黃褐色顆粒為陽性，采用圖像分析技術(shù)進(jìn)行相對定量分析，以平均光密度(mean optical density,MOD)值表示免疫染色結(jié)果。原位分子雜交結(jié)果以細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞核出現(xiàn)明顯黃色

4、或黃褐色顆粒為陽性染色，計數(shù)每高倍視野肝間質(zhì)內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)。 結(jié)果： (1)感染后6wk，匯管區(qū)可見大量嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤，亦可見一定數(shù)量的單核細(xì)胞浸潤。肝內(nèi)病變主要是散在分布于匯管區(qū)的急性蟲卵結(jié)節(jié)，部分匯管區(qū)見蟲卵聚集成簇，蟲卵結(jié)節(jié)周圍可見少量膠原纖維。AST兩個劑量組病理形態(tài)學(xué)改變與模型組差異無顯著性(P>0.05)；10wk和14wk末，血吸蟲肝病的主要表現(xiàn)為慢性蟲卵結(jié)節(jié)和纖維化結(jié)節(jié)，蟲卵周圍主要為梭形的成纖維細(xì)胞

5、和膠原纖維包繞，可見膠原纖維沿匯管區(qū)延伸并相互連接，部分肝細(xì)胞間亦可見少量膠原纖維。AST兩個劑量組蟲卵結(jié)節(jié)面積及纖維化程度較模型組明顯降低(P<0.01，P<0.05)。 　　(2)ESM.1 mRNA及蛋白在正常小鼠肝組織中僅血管內(nèi)皮細(xì)胞和部分肝細(xì)胞有較弱陽性反應(yīng)，主要定位于細(xì)胞質(zhì)。 (3)血吸蟲肝病組織中，ESM-1蛋白免疫染色定位于細(xì)胞質(zhì)，主要分布在蟲卵結(jié)節(jié)和肝間質(zhì)的各種炎細(xì)胞(單核細(xì)胞、粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞)、成纖維細(xì)

6、胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、膽管上皮細(xì)胞和肝細(xì)胞。 (4)血吸蟲肝病組織中，ESM-1 mRNA在細(xì)胞中定位于細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞核，在組織中主要分布在蟲卵結(jié)節(jié)和肝間質(zhì)，在炎細(xì)胞(單核細(xì)胞、粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞)、膽管上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和肝細(xì)胞表達(dá)，成纖維細(xì)胞未檢測出ESM-1 mRNA。 (5)血吸蟲肝病組織中(模型組)，ESM-1蛋白的MOD值均高于相應(yīng)的正常對照組，10wk及14wk時較6wk時顯著增高(P<0.01)，但10

7、wk和14wk間比較差異無顯著性(P>0.05)；6wk時AST高、低劑量組和模型組之間ESM-1蛋白水平差異無顯著性(P>0.05)，10wk和14wk時ASI'兩個劑量組ESM-1的蛋白水平低于模型組(.P<0.01)；10wk時AST高、低劑量組ESM-1 mRNA陽性細(xì)胞計數(shù)低于模型組(P<0.01)。 結(jié)論：小鼠血吸蟲病肝組織中，炎細(xì)胞可能是產(chǎn)生ESM-1的主要細(xì)胞之一，成纖維細(xì)胞可能存在ESM.1受體。推測ESM.