日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原體外誘導巨噬細胞分泌TNF-α活化肝星狀細胞及黃芪總苷對其影響.pdf

1、血吸蟲病是一種在熱帶或亞熱帶國家和地區(qū)廣泛傳播并嚴重危害人類健康的寄生蟲病，肝纖維化是其嚴重的病變后果。纖維化的形成是通過巨噬細胞、淋巴細胞、纖維細胞和其它細胞產(chǎn)生的細胞因子動態(tài)調(diào)節(jié)的過程<'[1，2]>。TNF-a 作為重要的炎癥介質(zhì)可直接參與肝纖維化中的關(guān)鍵細胞肝星狀細胞(hepatic stellate cell，HSC)的活化，促進其增殖。黃芪總苷(astrogalosides，AST)是黃芪抗肝纖維化的主要成份，研究已證實AS

2、T具有顯著的抗炎和抗肝纖維化等作用。本文觀察日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原(soluble egg antigen，SEA)體外刺激巨噬細胞后，TNF-a表達和分泌的改變以及SEA活化的腹腔巨噬細胞條件培養(yǎng)基(soluble egg antigeninduced macrophage conditioned medium，SEA-MCM)對 HSC 增殖刺激膠原合成的影響，并在此基礎(chǔ)上，觀察AST對其的作用。 1SEA誘導大鼠腹腔巨噬細

3、胞活化和TNF-α表達及AST對其影響制各 SEA(0.17g·L<'-1>)，采用HE染色、免疫細胞化學染色、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)及放射免疫法，觀察在SEA(10 mg/L)的刺激下，AST與大鼠腹腔巨噬細胞(peritoneal macrophage，PMΦ)在體外共育3h、6h和9h后，大鼠PMΦs形態(tài)改變及對TNF-a表達的影響。結(jié)果顯示：(1)SEA(10 mg/L)作用3h、6h和9h 可明顯刺激 PMF

4、活化和增加TNF-a的表達；(2)AST(10，20 mg/L)能明顯降低SEA(10 mg/L)刺激的 PMF TNF-a 的表達。提示SEA體外可以活化PMF，使其增加TNF-a的表達，AST可抑制這種TNF-a的表達。 2．SEA-MCM誘導HSC活化及AST對其抑制作用大鼠腹腔注射 SEA(0．17mg·ml<'-1>，0．2ml/只)，制備SEA-MCM。利用肝星狀細胞株HSC-T6細胞，采用MTT和<'3>H－脯氨酸

5、摻入法，觀察SEA-MCM誘導HSC-T6細胞增殖和膠原合成的作用及AST對其影響。結(jié)果顯示：(1)不同稀釋度的SEA-MCM(終稀釋比1∶2、1∶4、1∶8、1∶16)均可明顯促進HSC-T6細胞增殖和膠原合成；(2)AST(10和20 mg/L)呈濃度依賴性抑制SEA-MCM(1∶4)刺激的HSC-T6細胞增殖和膠原合成。表明SEA可以通過活化的巨噬細胞促進HSC增殖和膠原合成，這種作用可被AST抑制。 3．抗TNF-α抗體

6、對SEA-MCM誘導的HSC-T6細胞增殖和膠原合成影響在SEA-MCM(1∶4)中加入不同稀釋度TNF-a抗體，采用MTT、免疫印記(Western blotting)和放射免疫法檢測SEA-MCM對HSC-T6細胞增殖和膠原合成的作用。 結(jié)果顯示：TNF-a抗體(1∶100和1∶200)均可明顯抑制SEA-MCM對HSC-T6細胞的增殖和膠原合成作用，且呈濃度依賴性趨勢。表明SEA通過巨噬細胞分泌TNF-a 促進 HSC 的