高糖環(huán)境對BMP-2、IGF-1轉染大鼠BMSCs基因表達的影響.pdf

1、骨折愈合過程包括兩部分，即細胞因子對骨髓間充質干細胞分化增殖的調控和細胞因子的骨誘導。骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2，BMP-2)與胰島素樣生長因子-1（insulin-like growth factor，IGF-1）是影響骨折愈合的重要細胞因子。BMP-2可誘導大鼠骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC)分化成骨細胞，是成骨作用最

2、強的因子；IGF-1可促進成骨細胞的形成和分化，并有類似胰島素的作用。糖尿病患者骨折難愈合、不愈合是多因素共同作用的結果，已有實驗證實，糖尿病患者體內BMP-2及IGF-1水平在骨折端局部及血清均降低，早期局部骨癡中BMP-2，IGF-1表達減少及早期血清中BMP-2、IGF-I含量減少是導致糖尿病大鼠骨折愈合差的重要原因之一。但能否將外源BMP-2、IGF-I引入BMSCs內從而提高二者的表達來為治療糖尿病骨折難愈合、不愈合尚無系統(tǒng)研

3、究。
　　 目的：觀察骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2、胰島素樣生長因子-1在高糖環(huán)境下能否轉染大鼠骨髓間充質干細胞，轉染成功后目的基因是否表達及表達量的情況，及二者有無協(xié)同效應。
　　 方法：選擇Wistar雄性大鼠BMSC傳代后第3代細胞作為腺病毒介導基因轉染的靶細胞，分為實驗對照組，空載體組，BMP-2組，IGF-1組，BMP-2+IGF-1組，每組設3樣本。其中實驗對照組未經(jīng)腺病毒感染，空載體組由未負載目的基因的空白腺病毒感染

4、，其余組由各自對應的負載目的基因的腺病毒感染。應用real-time PCR技術，酶聯(lián)免疫吸附劑測定法(ELISA)法進行檢測，實驗數(shù)據(jù)采用(?)±s表示，采用成組設計資料的t檢驗分析由SPSS17.0統(tǒng)計軟件完成，P＜0.05表示統(tǒng)計學上差異有顯著性，P＜0.01表示統(tǒng)計學上差異非常顯著。
　　 結果：高糖環(huán)境下BMP-2、IGF-1基因各自及共同轉染BMSC后，BMSC成活，BMP-2基因表達的產(chǎn)物峰值出現(xiàn)在轉染后72h，B

5、MP-2組灰度值為(1.86±0.06)，產(chǎn)物濃度為(58.6±1.61)μg/L，BMP-2+IGF-1組灰度值為(2.37±0.34)，產(chǎn)物濃度為(67.61±1.91)μg/L，兩組差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；1GF-1的基因表達的產(chǎn)物峰值出現(xiàn)在轉染后48h，IGF-1組灰度值為(1.48±0.03)，產(chǎn)物濃度為(65.17±3.64)μg/L，BMP-2+IGF-1組灰度值為(1.93±0.17)，產(chǎn)物濃度為(73.94