血管緊張素Ⅱ?qū)μ悄虿〈笫竽I臟Megsin、PAI-1、IGF-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:糖尿病(diabetes mellitus,DM)是危害人類生命最嚴(yán)重的疾病之一。糖尿病腎病是糖尿病的慢性微血管并發(fā)癥,其發(fā)病率有逐年增加趨勢(shì),是糖尿病患者的主要死亡原因之一。如何防治糖尿病腎病,降低病死率,是當(dāng)前臨床腎臟病學(xué)密切關(guān)注的課題。
　　 糖尿病腎病的病理特點(diǎn)是細(xì)胞外基質(zhì)增多,基底膜增厚及腎小球硬化,最近的研究報(bào)道糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展與眾多的細(xì)胞因子密切相關(guān),體內(nèi)外研究顯示一些細(xì)胞因子在糖尿病腎病時(shí)表達(dá)上調(diào),信號(hào)

2、通道的激活最終調(diào)控影響腎小球細(xì)胞外基質(zhì)沉積的轉(zhuǎn)錄因子。首要的影響因子包括AngⅡ、TGF-β、IGF。生理環(huán)境下細(xì)胞外基質(zhì)的合成和降解間的微妙平衡關(guān)系不引起系膜膨脹。AngⅡ通過與AT1受體結(jié)合激活纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)和組織基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)。PAI-1和TIMP-1抑制金屬蛋白酶,從而抑制基質(zhì)代謝,使細(xì)胞外基質(zhì)積聚。Megsin是一種系膜細(xì)胞優(yōu)勢(shì)表達(dá)基因,定位于18q21.3,與絲氨酸蛋白酶結(jié)合

3、,發(fā)揮絲氨酸蛋白酶抑制劑(serine protease inhibitor,serpin)的活性。Megsin作為serpin的成員之一,已有研究證實(shí)megsin參與糖尿病腎病系膜基質(zhì)代謝的調(diào)控,影響基質(zhì)金屬蛋白酶MMP活性,通過MAPK途徑激活細(xì)胞因子和炎癥因子,參與了糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制。本文意在觀察血管緊張素Ⅱ?qū)egsin、PAI-1、IGF-1在腎臟表達(dá)的影響,探討阻斷血管緊張素Ⅱ?qū)ρ泳徧悄虿∧I病進(jìn)展的確切作用。
　　

4、 本課題通過腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)建立糖尿病大鼠模型,后分成糖尿病組(B組),雷米普利干預(yù)組(C組),及未注射STZ的正常對(duì)照組(A組),觀察三組大鼠腎臟病理變化,采用免疫組化和western-blot方法檢測(cè)三組大鼠腎臟組織中megsin、PAI-1、IGF-1表達(dá)變化,探討AngⅡ與megsin、PAI-1、IGF-1的關(guān)系,為臨床防治糖尿病腎病提供實(shí)驗(yàn)性理論依據(jù)。
　　 方法:選

5、取12周齡健康清潔級(jí)雄性SD大鼠,共48只,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,隨機(jī)抽取32只腹腔注射STZ(溶于0.1 mol/L檸檬酸緩沖液,濃度2％,pH值4.5,注射劑量65mg/kg)制備糖尿病大鼠模型,72小時(shí)后測(cè)定血糖,血糖≥16.7mmol/L,確定為糖尿病大鼠模型,隨機(jī)將32只糖尿病大鼠分為糖尿病組(B組)、雷米普利干預(yù)組(C組),每組16只,將未注射STZ的12只大鼠作為正常對(duì)照組(A組),C組每日灌胃雷米普利3mg/kg/d,A組和

6、B組每日灌胃同等量的生理鹽水,整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由飲食,不使用胰島素及其它降糖藥物。于實(shí)驗(yàn)12周末時(shí)收集血、尿及腎組織標(biāo)本,檢測(cè)血肌酐、24h尿蛋白定量及腎重/體重比值;石蠟切片行HE和MASSON染色觀察腎小球病理改變,免疫組織化學(xué)染色和Western-bloting檢測(cè)megsin、PAI-1、IGF-1的表達(dá)情況,結(jié)果用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示,組間差異性比較采用單因素方差分析和q檢驗(yàn),顯著性水平等于0.05,應(yīng)用SPSS13

7、.0軟件包對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果:
　　 1：B組、C組大鼠注射STZ4～5天后即出現(xiàn)多飲、多食、多尿表現(xiàn),而A組則無上述情況出現(xiàn)。12周末B、C組大鼠尿蛋白定量、血肌酐和腎重/體重比值升高(P＜0.01),B組升高更為明顯(P＜0.01)。
　　 2：光鏡HE顯示12周末B、C組腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)目較A組增多(P＜0.01),B組增多更顯著(P＜0.01);光鏡HE、MASSON染色顯示,第12周末

8、B組腎小球體積增大,基底膜增厚,細(xì)胞外基質(zhì)積聚,C組較B組病變減輕。
　　 3：免疫組化和western blot結(jié)果顯示4周末B、C組Megsin、PAI-1、IGF-1表達(dá)增強(qiáng),B組變化更顯著,組間差異有顯著性意義(p＜0.01,p＜0.05);12周末上述各指標(biāo)變化更為明顯,組間比較有顯著性差異(p＜0.01,p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1：糖尿病大鼠腎組織中細(xì)胞外基質(zhì)積聚、系膜細(xì)胞增殖、腎臟肥大

9、及。腎功能受損與megsin在腎臟組織表達(dá)增強(qiáng)有關(guān),與腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)等相關(guān),推測(cè)megsin在糖尿病腎病的進(jìn)展中起一定作用。
　　 2：血管緊張素濃度減少,megsin、PAI-1、IGF-1在腎臟表達(dá)下降,提示megsin、PAI-1、IGF-1因子的轉(zhuǎn)錄激活可能與血管緊張素有關(guān),血管緊張素誘導(dǎo)上述因子在糖尿病腎臟組織表達(dá)上調(diào),但其具體的激活方式、位點(diǎn)、通道有待進(jìn)一步研究闡明。
　　 3：血管緊張素轉(zhuǎn)換酶