具有良好抑菌性能的芽孢桿菌和乳酸菌的篩選及效價評估.pdf

1、本實驗從斷奶仔豬糞便中篩選具有抑菌作用的菌株，根據(jù)其生理特性進行復(fù)篩，然后與益生元及實驗室已有的優(yōu)良菌株進行復(fù)配，找出最佳的菌株組合，并應(yīng)用到斷奶仔豬，對其益生性能進行評價。
　?。?）從健康的斷奶仔豬糞便中分離、純化出乳酸菌6株和芽孢桿菌8株，以4株禽畜養(yǎng)殖中常見致病菌作為指示菌來評價它們的抑菌能力，發(fā)現(xiàn)乳酸菌中R1抑菌能力最好；芽孢桿菌中抑菌能力最好的是A6和A7。
　?。?）耐受性實驗表明：芽孢桿菌A7耐酸能力和耐膽鹽

2、能力最好，在 pH2的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h后存活率仍有30％，在含0.3%牛膽鹽的培養(yǎng)基上生長良好；乳酸菌R1和 R3在 pH為3的環(huán)境處理3 h后存活率顯著的高于其它4株乳酸菌（p＜0.05）），R1對于牛膽鹽環(huán)境的耐受能力最強，存活率都要顯著地高于另外的5株乳酸菌（p＜0.05）；藥敏性試驗表明，在10種常見的抗生素中，芽孢桿菌 A6和 A7僅僅對青霉素耐受，乳酸菌對10種抗生素的耐受情況差異比較大，但都對氯霉素、氨芐西林、

3、先鋒霉素V敏感，此外R1能夠較好的耐受丁胺卡那霉素、慶大霉素、諾氟沙星和環(huán)丙沙星。
　?。?）采用Ⅲ型豬蛋白模擬仔豬腸道環(huán)境來評價菌株的粘附性，乳酸菌中 R1和芽孢桿菌 A6、 A7的粘附能力最強，粘附率分別為22.86±0.635%、25.00±1.129%、30.48±5.323%），顯著地強于其它菌株（p＜0.05）。
　　（4）單糖復(fù)配實驗發(fā)現(xiàn)，0.5%的甘露糖和1.0%的殼寡糖對 R1的生長促進作用最強，提升率分別

4、為254.50%和238.20%；0.5%的低聚木糖對 A7的生長促進作用最強，提升率為129.47%。
　?。?）將 R1和 A7分別與 EM、 BS3進行組合搭配，檢測對4株致病菌的生長抑制能力，發(fā)現(xiàn)R1和EM的復(fù)配組合的抑菌能力最強，R1和 A7的組合對4株致病菌也具有較強的生長抑制能力。
　　（6）分別采用對峙培養(yǎng)法和雙層培養(yǎng)基法來探究 R1、 A7、BS3和 EM間的相互抑制情況，發(fā)現(xiàn) R1和 EM都對 A7與 B

5、S3的生長有著較強的抑制， A7和BS3間沒有相互抑制，R1和 EM間也具有較弱的相互抑制能力。
　?。?）R1、 EM和 A7進行固態(tài)發(fā)酵， R1在37℃發(fā)酵48 h時活菌數(shù)最高，達4.9×109 cfu/g， A7在30℃發(fā)酵48 h后，活菌數(shù)可以達到3.7×1010 cfu/g；保存試驗表明R1烘干后，在4℃環(huán)境保存4周時，存活率為71.99%，超過4周則活菌數(shù)迅速地下降，A7保存8周后活菌數(shù)沒有下降。
　　（8）在4

6、2日齡的斷奶仔豬日糧中分別添加 R1、R1和 A7混合菌、R1和 EM的混合菌飼喂28天后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在整個實驗過程中，斷奶仔豬的生長性能和腹瀉率與對照組相比都不具有顯著性地差異（p>0.05）；此外在整個實驗過程中，除了在實驗的后兩周，R1、R1和EM的混菌這2個實驗組的斷奶仔豬血清中二胺氧化酶的含量要顯著地抵于陽性對照組外（p<0.05），另外的血清生化指標都不具有顯著性地差異（p>0.05）；最后，在第28天時的糞便微生物進行分析后