具有良好抑菌性能的芽孢桿菌和乳酸菌的篩選及效價(jià)評(píng)估.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)從斷奶仔豬糞便中篩選具有抑菌作用的菌株，根據(jù)其生理特性進(jìn)行復(fù)篩，然后與益生元及實(shí)驗(yàn)室已有的優(yōu)良菌株進(jìn)行復(fù)配，找出最佳的菌株組合，并應(yīng)用到斷奶仔豬，對(duì)其益生性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　?。?）從健康的斷奶仔豬糞便中分離、純化出乳酸菌6株和芽孢桿菌8株，以4株禽畜養(yǎng)殖中常見(jiàn)致病菌作為指示菌來(lái)評(píng)價(jià)它們的抑菌能力，發(fā)現(xiàn)乳酸菌中R1抑菌能力最好；芽孢桿菌中抑菌能力最好的是A6和A7。
　?。?）耐受性實(shí)驗(yàn)表明：芽孢桿菌A7耐酸能力和耐膽鹽

2、能力最好，在 pH2的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h后存活率仍有30％，在含0.3%牛膽鹽的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好；乳酸菌R1和 R3在 pH為3的環(huán)境處理3 h后存活率顯著的高于其它4株乳酸菌（p＜0.05）），R1對(duì)于牛膽鹽環(huán)境的耐受能力最強(qiáng)，存活率都要顯著地高于另外的5株乳酸菌（p＜0.05）；藥敏性試驗(yàn)表明，在10種常見(jiàn)的抗生素中，芽孢桿菌 A6和 A7僅僅對(duì)青霉素耐受，乳酸菌對(duì)10種抗生素的耐受情況差異比較大，但都對(duì)氯霉素、氨芐西林、

3、先鋒霉素V敏感，此外R1能夠較好的耐受丁胺卡那霉素、慶大霉素、諾氟沙星和環(huán)丙沙星。
　　（3）采用Ⅲ型豬蛋白模擬仔豬腸道環(huán)境來(lái)評(píng)價(jià)菌株的粘附性，乳酸菌中 R1和芽孢桿菌 A6、 A7的粘附能力最強(qiáng)，粘附率分別為22.86±0.635%、25.00±1.129%、30.48±5.323%），顯著地強(qiáng)于其它菌株（p＜0.05）。
　?。?）單糖復(fù)配實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，0.5%的甘露糖和1.0%的殼寡糖對(duì) R1的生長(zhǎng)促進(jìn)作用最強(qiáng)，提升率分別

4、為254.50%和238.20%；0.5%的低聚木糖對(duì) A7的生長(zhǎng)促進(jìn)作用最強(qiáng)，提升率為129.47%。
　?。?）將 R1和 A7分別與 EM、 BS3進(jìn)行組合搭配，檢測(cè)對(duì)4株致病菌的生長(zhǎng)抑制能力，發(fā)現(xiàn)R1和EM的復(fù)配組合的抑菌能力最強(qiáng)，R1和 A7的組合對(duì)4株致病菌也具有較強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制能力。
　　（6）分別采用對(duì)峙培養(yǎng)法和雙層培養(yǎng)基法來(lái)探究 R1、 A7、BS3和 EM間的相互抑制情況，發(fā)現(xiàn) R1和 EM都對(duì) A7與 B

5、S3的生長(zhǎng)有著較強(qiáng)的抑制， A7和BS3間沒(méi)有相互抑制，R1和 EM間也具有較弱的相互抑制能力。
　?。?）R1、 EM和 A7進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵， R1在37℃發(fā)酵48 h時(shí)活菌數(shù)最高，達(dá)4.9×109 cfu/g， A7在30℃發(fā)酵48 h后，活菌數(shù)可以達(dá)到3.7×1010 cfu/g；保存試驗(yàn)表明R1烘干后，在4℃環(huán)境保存4周時(shí)，存活率為71.99%，超過(guò)4周則活菌數(shù)迅速地下降，A7保存8周后活菌數(shù)沒(méi)有下降。
　　（8）在4

6、2日齡的斷奶仔豬日糧中分別添加 R1、R1和 A7混合菌、R1和 EM的混合菌飼喂28天后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能和腹瀉率與對(duì)照組相比都不具有顯著性地差異（p>0.05）；此外在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，除了在實(shí)驗(yàn)的后兩周，R1、R1和EM的混菌這2個(gè)實(shí)驗(yàn)組的斷奶仔豬血清中二胺氧化酶的含量要顯著地抵于陽(yáng)性對(duì)照組外（p<0.05），另外的血清生化指標(biāo)都不具有顯著性地差異（p>0.05）；最后，在第28天時(shí)的糞便微生物進(jìn)行分析后