蛻皮甾酮對兔實驗性皮膚傷口的促愈合作用及其機制.pdf

1、1背景：
　　 傷口愈合是創(chuàng)傷后引起的病理過程的總稱，是以組織再生為主，許多因素共同參與機體自身修復(fù)的復(fù)雜過程。正常的創(chuàng)面愈合過程主要包括三個階段：炎癥反應(yīng)期、細(xì)胞增殖期和細(xì)胞外基質(zhì)重建期。
　　 皮膚創(chuàng)傷常常包括表皮、真皮甚至皮膚附屬器的損傷，即存在細(xì)胞功能障礙或組織缺損。其愈合過程包括傷口早期止血，創(chuàng)面保護(hù)，炎癥控制及多種組織細(xì)胞的增生，肉芽組織的形成，創(chuàng)緣的爬行收縮等。而內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等細(xì)胞的增殖是

2、形成肉芽組織的關(guān)鍵，也是傷口愈合的關(guān)鍵。
　　 影響傷口愈合的因素很多，如年齡、營養(yǎng)狀況、創(chuàng)面大小和一些全身性疾病等。某些因素可致傷口經(jīng)久不愈，屬于臨床治療上的棘手問題。慢性難愈性傷口因其傷口內(nèi)壞死組織、微生物感染、機體代謝等因素導(dǎo)致了細(xì)胞增殖的抑制，使其停留在炎癥反應(yīng)期，而不進(jìn)入下一個階段細(xì)胞增殖期。雖然新技術(shù)和新手段層出不窮，但是對于慢性皮膚潰瘍等難愈傷口的治療效果卻仍然欠佳。有研究指出，到2030年，全球由于慢性皮膚潰瘍而

3、需要截肢的患者將比現(xiàn)在增加30％以上。因此，有必要進(jìn)行更深入的研究和實踐，開發(fā)符合臨床要求和國際標(biāo)準(zhǔn)的促愈高效藥物。
　　 蛻皮甾酮(ecdysterone，EDS)在動物體內(nèi)又稱β-蛻皮激素。它是一種昆蟲變態(tài)激素，能刺激昆蟲真皮細(xì)胞分裂，產(chǎn)生新的表皮，導(dǎo)致昆蟲變態(tài)，調(diào)節(jié)昆蟲新陳代謝。但它在植物界的分布較動物界更為廣泛，且含量較高，資源豐富。目前所應(yīng)用的蛻皮激素主要由植物中提取。
　　 蛻皮甾酮在脊椎動物中也是必需的物質(zhì)

4、。研究發(fā)現(xiàn)，它對高等動物也表現(xiàn)出較強的藥理活性，而且副作用小。目前所知其作用主要有：1）、促進(jìn)核酸及蛋白質(zhì)的合成；2）、調(diào)節(jié)糖代謝；3)、調(diào)節(jié)脂代謝；4）、調(diào)節(jié)基因表達(dá)；5）、改善免疫功能；6）、抗氧化作用；7）、促進(jìn)缺血區(qū)血管的生成和側(cè)支循環(huán)的建立；8）、促進(jìn)多種細(xì)胞增殖的作用等。
　　 本課題組前期研究證明蛻皮甾酮能有效促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，并已制作出有明顯促愈作用的蛻皮甾酮乳膏（發(fā)明專利號：200710030920.6）。本實驗采

5、用新西蘭大白兔皮膚全層切除創(chuàng)傷模型，研究蛻皮甾酮對實驗性皮膚創(chuàng)傷的促愈合作用及可能機制，為蛻皮甾酮乳膏在臨床創(chuàng)傷的應(yīng)用提供依據(jù)。
　　 2目的：
　　 探討蛻皮甾酮促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合的作用及其可能的機制，為蛻皮甾酮乳膏在臨床創(chuàng)傷的應(yīng)用提供依據(jù)。
　　 3方法：
　　 取健康新西蘭大白兔40只，以戊巴比妥35mg/kg耳緣靜脈注射麻醉，背部用10%硫化鈉脫毛，以碘伏消毒皮膚后用外科方法剪去直徑約1.8cm的圓

6、形全層皮膚，深達(dá)肌膜，造成全皮層缺損創(chuàng)傷模型。每只兔子均有3個創(chuàng)面，標(biāo)記為A、B、C，分別設(shè)為空白對照(A組，僅予一般消毒處理)、云南白藥組（B組，涂抹云南白藥粉，每次約0.5g）、蛻皮甾酮乳膏組（C組，涂抹2.5%蛻皮甾酮乳膏，每次涂抹量約0.5ml）。敷藥后所有傷口均用凡士林油紗敷蓋，再用干紗布包扎。傷口每天予鹽水沖洗、碘伏消毒后各用原法處理換藥。每只兔分籠飼養(yǎng)。
　　 隨機選取10只兔子，分別于造模后4d、8d、12d觀察

7、各組創(chuàng)面愈合率及創(chuàng)面組織肉眼變化情況，并記錄各創(chuàng)面愈合時間，進(jìn)行組間比較。其余30只兔子分別于造模后4d、8d、12d處死，取組織標(biāo)本，每次10只。常規(guī)HE染色、制片后，通過光鏡觀察組織切片病理學(xué)變化，并進(jìn)行組織病理學(xué)評分來評價治療效果。用免疫組化SP法檢測各組空白切片上創(chuàng)緣表皮生長因子受體（epidermal growthfactor receptor, EGFR)的表達(dá)。ELISA法定量檢測創(chuàng)面周邊組織堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bas

8、ic fibroblast growth factor, bFGF)含量。
　　 計量資料均以x±S表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析處理數(shù)據(jù)（采用方差分析，包括One-Way ANOVA和Repeated Measures，其中兩兩比較用LSD或Dunnett'sT3檢驗）。
　　 4結(jié)果：
　　 三組皮膚創(chuàng)面在觀察期間(0-12d)，創(chuàng)面隨時間增加愈合率在提高，說明所造模型有一定的自然愈合能力。造模后4d

9、，各組創(chuàng)面愈合率無明顯差別(P＞0.05)。造模后8d及12d，C組和B組的創(chuàng)面愈合率無明顯差別(P＞0.05)，但二者均明顯高于A組(P＜0.01)。
　　 創(chuàng)面愈合時間統(tǒng)計結(jié)果顯示：A組、B組和C組分別為(18.60±1.776)d，（14.80士1.229）d，（13.80士0.789）d。統(tǒng)計學(xué)差異顯著(P＜0.01)。C組創(chuàng)面愈合時間最短，其次是B組，二者比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。但這兩組創(chuàng)面愈合時間均明

10、顯少于A組(P＜0.01)，說明蛻皮甾酮乳膏與云南白藥均能有效縮短創(chuàng)傷愈合時間。
　　 創(chuàng)面肉眼觀察顯示：造模后4d，各組創(chuàng)面濕潤，無明顯膿液形成，傷口收縮不明顯。C組的創(chuàng)面可見少許壞死組織，其下組織略水腫；B組的創(chuàng)面可見含壞死組織的痂皮脫落，表皮開始向創(chuàng)面生長；A組的皮膚創(chuàng)面可見含大量炎癥細(xì)胞的壞死組織，其下組織炎癥細(xì)胞浸潤。造模后8d，C組及B組傷口濕潤、無感染，傷口表面及皮下組織收縮明顯；A組仍可見滲出，個別傷口出現(xiàn)潰瘍。

11、造模后12d，C組及B組傷口進(jìn)一步收縮，創(chuàng)面干燥，表面結(jié)厚痂，未愈合面積較??；A組傷口面積較造模后8d有明顯收縮，創(chuàng)面邊緣結(jié)痂，但仍有很大面積未愈合。
　　 創(chuàng)面組織切片光鏡下觀察顯示：造模后4d，各組創(chuàng)面均以滲出和充血為主，肉芽組織增生較少，各組創(chuàng)面組織病理學(xué)評分無明顯差別(P＞0.05)。造模后8d，C組及B組創(chuàng)面無充血滲出，肉芽組織形成，少許炎性細(xì)胞浸潤，膠原束較多，上皮細(xì)胞少許增生；A組仍可見炎性滲出伴潰瘍形成，膠原形成

12、較少，上皮增生不明顯。C組與B組創(chuàng)面組織病理學(xué)評分無明顯差別(P＞0.05)，二者均明顯高于A組(P＜0.01)。造模后12d，C組及B組創(chuàng)面有較多肉芽組織形成，真皮與表皮連接處少許炎性細(xì)胞浸潤，大量膠原形成，上皮細(xì)胞及纖維細(xì)胞增生明顯。A組膠原含量、上皮細(xì)胞及纖維細(xì)胞增生程度均低于C組和B組。C組與B組創(chuàng)面組織病理學(xué)評分無明顯差別(P＞0.05)，二者均明顯高于A組(P＜0.01)。
　　 創(chuàng)面組織切片免疫組化EGFR的表達(dá)情

13、況：正常皮膚內(nèi)EGFR表達(dá)為弱陽性。創(chuàng)傷組織EGFR的表達(dá)主要分布于創(chuàng)面邊緣及移行區(qū)的表皮基底細(xì)胞、棘細(xì)胞、毛囊上皮、真皮成纖維細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞、汗腺上皮的胞膜及胞漿中，壞死組織無表達(dá)。造模后4d、8d及12d，C組和B組的創(chuàng)面組織EGFR陽性細(xì)胞面積比均無明顯差別(P＞0.05)，二者均明顯高于A組(P＜0.01)。各組均為造模后8d的創(chuàng)面組織EGFR陽性細(xì)胞面積比最高，即在造模后8d，EGFR的表達(dá)高于造模后4d和12d(P＜0.

14、01)。造模后12d的創(chuàng)面組織EGFR的表達(dá)明顯高于造模后4d(P＜0.05)。
　　 創(chuàng)面周邊組織bFGF的表達(dá)情況：造模后4d、8d及12d，C組的bFGF的表達(dá)最高，其次是B組，A組表達(dá)水平最低，各組間兩兩比較均有顯著性差異(P＜0.01)。各組均為造模后8d的創(chuàng)面周邊組織bFGF的表達(dá)水平高于造模后4d和12d(P＜0.01)。造模后12d的創(chuàng)面周邊組織bFGF的表達(dá)水平低于造模后4d(P＜0.01)。
　　 5