基于連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LCR)高靈敏度檢測(cè)DNA甲基化.pdf

1、DNA甲基化是一種真核生物基因組不可缺少的表觀遺傳學(xué)修飾，它特異性地發(fā)生在CpG二核苷酸的胞嘧啶上。曾有報(bào)道證實(shí)抑癌基因的非正常甲基化狀態(tài)在許多疾病尤其是癌癥中很常見(jiàn)，多與轉(zhuǎn)錄抑制有關(guān)系。DNA甲基化越來(lái)越多地被用作癌癥檢測(cè)和各種診斷的基因標(biāo)志物。因此，快速、靈敏地檢測(cè)DNA甲基化是非常必要的。并且，一般情況下，一種癌癥會(huì)與多個(gè)CpG甲基化相關(guān)，因此同時(shí)檢測(cè)多個(gè)CpG甲基化可以大大提高癌癥檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
　　我們建立了兩種基于連接

2、酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（LCR）高靈敏度檢測(cè)基因組中DNA甲基化的方法。第一種是LCR反應(yīng)之后，擴(kuò)增產(chǎn)物通過(guò)與納米金上兩種與產(chǎn)物互補(bǔ)的探針進(jìn)行雜交反應(yīng)而使納米金之間的距離拉近，形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)聚積物進(jìn)而導(dǎo)致溶液顏色由紅色變成藍(lán)色，因此，可以通過(guò)可視化檢測(cè)DNA甲基化并且通過(guò)吸收光譜對(duì)其進(jìn)行定量分析。該方法可以檢測(cè)低至0.01fmol/L甲基化DNA片段和1 ng甲基化基因組DNA，在大量非甲基化DNA中可以檢測(cè)到0.1％的甲基化DNA。第二種是在一條L

3、CR探針上標(biāo)記熒光基團(tuán)，LCR產(chǎn)物通過(guò)ABI310基因分析儀進(jìn)行電泳分離和熒光檢測(cè)。由于LCR可以準(zhǔn)確區(qū)分單堿基錯(cuò)配，DNA甲基化檢測(cè)可以獲得高靈敏度和選擇性。該方法可以檢測(cè)低至0.01fmol/L甲基化DNA片段和10ng甲基化基因組DNA，在大量非甲基化DNA中可以檢測(cè)出0.1%的甲基化DNA。并且，針對(duì)不同目標(biāo)物，設(shè)計(jì)一個(gè)LCR探針具有不同長(zhǎng)度，從而產(chǎn)生不同長(zhǎng)度的LCR產(chǎn)物，經(jīng)過(guò)電泳分離之后實(shí)現(xiàn)在一個(gè)反應(yīng)體系中多個(gè)位點(diǎn)的同時(shí)檢測(cè)。