基于連接酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LCR)高靈敏度檢測DNA甲基化.pdf

1、DNA甲基化是一種真核生物基因組不可缺少的表觀遺傳學(xué)修飾，它特異性地發(fā)生在CpG二核苷酸的胞嘧啶上。曾有報道證實抑癌基因的非正常甲基化狀態(tài)在許多疾病尤其是癌癥中很常見，多與轉(zhuǎn)錄抑制有關(guān)系。DNA甲基化越來越多地被用作癌癥檢測和各種診斷的基因標(biāo)志物。因此，快速、靈敏地檢測DNA甲基化是非常必要的。并且，一般情況下，一種癌癥會與多個CpG甲基化相關(guān)，因此同時檢測多個CpG甲基化可以大大提高癌癥檢測的準(zhǔn)確性。
　　我們建立了兩種基于連接

2、酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（LCR）高靈敏度檢測基因組中DNA甲基化的方法。第一種是LCR反應(yīng)之后，擴增產(chǎn)物通過與納米金上兩種與產(chǎn)物互補的探針進行雜交反應(yīng)而使納米金之間的距離拉近，形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)聚積物進而導(dǎo)致溶液顏色由紅色變成藍色，因此，可以通過可視化檢測DNA甲基化并且通過吸收光譜對其進行定量分析。該方法可以檢測低至0.01fmol/L甲基化DNA片段和1 ng甲基化基因組DNA，在大量非甲基化DNA中可以檢測到0.1％的甲基化DNA。第二種是在一條L

3、CR探針上標(biāo)記熒光基團，LCR產(chǎn)物通過ABI310基因分析儀進行電泳分離和熒光檢測。由于LCR可以準(zhǔn)確區(qū)分單堿基錯配，DNA甲基化檢測可以獲得高靈敏度和選擇性。該方法可以檢測低至0.01fmol/L甲基化DNA片段和10ng甲基化基因組DNA，在大量非甲基化DNA中可以檢測出0.1%的甲基化DNA。并且，針對不同目標(biāo)物，設(shè)計一個LCR探針具有不同長度，從而產(chǎn)生不同長度的LCR產(chǎn)物，經(jīng)過電泳分離之后實現(xiàn)在一個反應(yīng)體系中多個位點的同時檢測。