基于噻唑烷二酮結構的新型PPARγ部分激動劑的抗糖尿病作用及機制研究.pdf

1、背景:
　　糖尿病在我國及世界的發(fā)病形勢十分嚴峻，已成為威脅人類健康的第三大疾病。糖尿病患者中90％屬于2型糖尿病。臨床治療2型糖尿病的藥物種類很多，其中，噻唑烷二酮類(Thiazolidinediones,TZDs)是一類人工合成的過氧化物酶增殖物激活受體γ(Peroxisomeproliferator-activated receptorγ，PPARγ)激動劑，它能改善外周胰島素敏感性并長期有效控制血糖。然而，經(jīng)典TZDs藥物

2、引起體重增加、體液潴留、骨折及心衰等副反應，嚴重地限制了其臨床使用。研究表明TZDs發(fā)揮胰島素增敏作用并不需要完全激動PPARγ，相反，對PPARγ激動能力較弱的PPARγ部分激動劑在保留胰島素增敏，發(fā)揮治療作用的同時，具有更好的安全性，顯示出良好的應用前景。
　　課題組成員在前期實驗中合成了一系列TZDs衍生物，成功建立PPARγ激動劑篩選模型，篩選出具有PPARγ部分激動效應的化合物:CMHX003和CMHX008。前期實驗結

3、果發(fā)現(xiàn)CMHX003和CMHX008可有效激動PPARγ，但激動能力弱于羅格列酮;CMHX008促進3T3-L1前脂肪細胞分化，增加脂肪細胞脂質沉積，并且這一作用可被PPARγ特異性阻斷劑GW9662所抑制;此外，CMHX008還可增強脂聯(lián)素和葡萄糖轉運體4(Glucose transporter4，Glut4) mRNA表達，增加脂聯(lián)素分泌，同時對aP2增強表達的作用明顯弱于羅格列酮。
　　因此，本研究旨在1）在細胞水平驗證CM

4、HX003對PPARγ的部分激動效應;2）觀察CMHX008對肥胖小鼠是否具有胰島素增敏作用，并探討其機制。
　　方法:采用經(jīng)典雞尾酒誘導法誘導3T3-L1前脂肪細胞分化，誘導過程中加入不同濃度的CMHX003和羅格列酮處理，誘導分化第7天，用油紅O染色觀察細胞分化情況，Real-time PCR檢測細胞脂聯(lián)素和aP2基因mRNA水平;ELISA法測定細胞培養(yǎng)上清液中脂聯(lián)素的分泌水平。
　　C57BL/6雄性小鼠用高脂飼料和

5、正常飼料喂養(yǎng)16周，將高脂喂養(yǎng)的小鼠隨機分為4組:溶劑對照組、羅格列酮(3mg/kg/day)組和CMHX008(3mg/kg/day和10mg/kg/day)組，每組7～8只，采用灌胃的方法給予溶劑或藥物5周。記錄小鼠體重變化，給藥4周后施行葡萄糖耐量試驗。實驗結束時，生化分析檢測血清脂質水平，ELISA檢測血清脂聯(lián)素濃度;液態(tài)芯片檢測血清胰島素及相關炎性因子濃度;H&E和油紅O染色法觀察肝臟脂質沉積和脂肪細胞形態(tài);Real-time

6、 PCR分析肝臟和脂肪組織炎性基因mRNA水平。
　　結果:CMHX003能促進3T3-L1前脂肪細胞分化，但其作用弱于羅格列酮;CMHX003增強脂聯(lián)素基因表達及增加脂聯(lián)素分泌水平的作用和羅格列酮相似，且較少增強aP2基因的表達。
　　CMHX008和羅格列酮均能顯著改善高脂飲食誘導肥胖小鼠的葡萄糖耐量受損。與高脂溶劑對照組相比，CMHX008能顯著降低脂肪組織重量、脂肪細胞的面積，降低血清低密度脂蛋白(LDL)、谷草轉氨

7、酶(AST)濃度，降低血清腫瘤壞死因子(TNF-α)和白介素6（IL-6）濃度。和羅格列酮組相比，CMHX008無明顯增加肝臟重量，并顯著減少肝臟脂質沉積。CMHX008降低脂肪組織中的M1型巨噬細胞標志基因CD11c的水平，增加M2型標志基因CD206水平，降低TNF-α、IL-6的mRNA水平，降低肝臟中TNF-α的mRNA表達。
　　結論:新型PPARγ部分激動劑CMHX008的在體胰島素增敏作用與羅格列酮相當;其效應與改善