新型噻唑烷酮化合物抗腦膠質(zhì)瘤的活性及其作用機(jī)制研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴(yán)重危害人類的健康，腦膠質(zhì)瘤是常見的惡性腫瘤之一，神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)生率占神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性腫瘤的78％，發(fā)病人群集中在青少年，復(fù)發(fā)率較高，治愈率低。藥物治療是目前臨床治療腦癌的主要手段之一。尋找和研發(fā)高效低毒的化療藥物，是當(dāng)代醫(yī)學(xué)和藥學(xué)的重要研究課題。噻唑烷酮化合物因其具有廣譜的抗癌活性和獨(dú)特的生理活性低毒性而日益受到人們重視。
　　 目的：從先期合成的噻唑烷酮類化合物庫中篩選出對(duì)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒性的化合物，其中ZHY-2

2、06(HBPT，2-(2-苯醚基亞胺基)-5-（2-羥基-苯亞甲基）-1，3-噻唑-4-酮）活性較好，本課題通過對(duì)其體外抗腦癌活性以及體內(nèi)對(duì)荷瘤小鼠的抗腫瘤活性的研究，從細(xì)胞水平探討其抗腫瘤作用機(jī)制，并考察HBPT的急性毒性，為研發(fā)噻唑烷酮化合物HBPT作為新型抗腦膠質(zhì)瘤化療藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：體外采用SRB法評(píng)價(jià)HBPT抑制人腦膠質(zhì)瘤U87MG細(xì)胞增殖；觀察HBPT對(duì)小鼠的急性毒性，建立小鼠皮下移植瘤模型，觀察HB

3、PT對(duì)人腦膠質(zhì)瘤的實(shí)驗(yàn)治療作用；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)的方法檢測HBPT對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡率和分析細(xì)胞周期的改變；應(yīng)用免疫熒光和微管聚合實(shí)驗(yàn)檢測化合物對(duì)微管的作用；應(yīng)用體外激酶篩選實(shí)驗(yàn)研究化合物的激酶作用靶點(diǎn)。
　　 結(jié)果：
　　 1．SRB法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：噻唑烷酮化合物HBPT對(duì)體外培養(yǎng)的U87MG細(xì)胞增殖有較好的抑制作用，48h后U87MG細(xì)胞的IC50值約為20μM。對(duì)荷瘤小鼠的抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HBPT對(duì)腦膠質(zhì)瘤有良好

4、的實(shí)驗(yàn)治療作用，經(jīng)腹腔注射連續(xù)給藥兩周后，40mg/kg/day、60mg/kg/day治療組的抑瘤率分別為：63.61％和73.16％，瘤重與陰性對(duì)照組比較均有明顯的顯著性差異(P＜0.01)。
　　 2．與溶劑對(duì)照組比較，噻唑烷酮化合物HBPT對(duì)荷瘤小鼠的造血系統(tǒng)、組織器官均無明顯差異(P＞0.05)，體重?zé)o明顯下降。相對(duì)于化療藥物TMZ（替莫唑胺）10mg/kg/day，HBPT抑瘤率較高，體現(xiàn)出一定的優(yōu)勢。
　　

5、 3．流式細(xì)胞儀檢測分析表明，HBPT能誘導(dǎo)U87MG腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，24h、48h早期凋亡占10％左右，細(xì)胞周期被阻滯在G2/M期，作用48h后處于G2/M期細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的50％左右。電鏡下觀察，HBPT作用于U87MG細(xì)胞引起細(xì)胞自噬現(xiàn)象的發(fā)生，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明自噬在HBPT對(duì)U87MG細(xì)胞作用過程中保護(hù)癌細(xì)胞，蛋白質(zhì)印跡試驗(yàn)表明細(xì)胞內(nèi)自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)水平上升。
　　 4．免疫熒光和體外微管聚合實(shí)驗(yàn)證明HBPT可以抑制

6、微管的聚集，呈劑量時(shí)間依賴性；激酶篩選實(shí)驗(yàn)表明化合物HBPT抗腫瘤作用不以激酶為靶標(biāo)。
　　 5．急性毒性試驗(yàn)表明HBPT無明顯的急性毒性，對(duì)BALB/c小鼠的口服最大劑量(MTD)≧400mg/kg，靜脈注射MTD≧60mg/kg。
　　 結(jié)論：噻唑烷酮化合物HBPT在體內(nèi)外均能有效抑制人腦膠質(zhì)瘤的生長，且無造血器官毒性作用，無明顯急性毒性。HBPT可抑制細(xì)胞內(nèi)微管聚集，將細(xì)胞阻滯在G2/M期，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。HBP