PPARγ激動劑對脊髓損傷神經(jīng)保護作用的機制研究.pdf

1、急性脊髓損傷(AcuteSpinalCordInjury，ASCI)是一種嚴重的神經(jīng)系統(tǒng)損傷，SCI可導(dǎo)致運動功能障礙，常遺留嚴重傷殘，給個人、家庭和社會帶來巨大經(jīng)濟負擔(dān)。治療急性脊髓損傷，恢復(fù)或者減少神經(jīng)損害，具有重要的意義。急性脊髓損傷目前分為原發(fā)性脊髓損傷和繼發(fā)性脊髓損傷。繼發(fā)性脊髓損傷具有可逆性，可被控制，因此說繼發(fā)性脊髓損傷決定了患者病情的最后轉(zhuǎn)歸。目前急性脊髓損傷治療的關(guān)鍵切入點在于繼發(fā)性脊髓損傷的治療。炎癥反應(yīng)是脊髓繼發(fā)性

2、損傷的主要因素。過氧化物酶增殖物激活受體(peroxisomeProliferateractivatedreceptor，PPARγ)是一類配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子超家族成員。最近研究發(fā)現(xiàn)在腦組織中PPARγ激動劑具有抗炎和抑制神經(jīng)凋亡保護作用。關(guān)于PPAR7對SCI的研究很少，它能否保護脊髓神經(jīng)元；促抑制脊髓損傷后炎癥性因子的分泌。本研究的目的是觀察PPARγ激動劑羅格列酮對大鼠SCI后的修復(fù)作用，并對其機制進行研究，為臨床SCI提供治療

3、策略。
　　 第一部分過氧化物酶增殖激活型受體γ(PPARγ)在大鼠脊髓組織中的表達
　　 目的：本實驗旨在闡述實驗性脊髓損后過氧化物酶增殖激活型受體γ的表達及時間分布規(guī)律。方法：10周齡SPF級50只SD大鼠隨機分為對照組和損傷組。對照組大鼠，僅做椎板切除術(shù)，損傷組采用改良Allen法制作大鼠急性脊髓損傷(SCI)模型，分別于傷后ld、3d、7d、14d(每時間點10只)處死取材。采用免疫組織化學(xué)，RT-PCR和Wes

4、ternblot法分別檢測檢測脊髓組織中過氧化物酶體增殖激活型受體γmRNA和蛋白的表達。結(jié)果：正常脊髓過氧化物酶增殖性受體PPARγmRNA表達量較低，脊髓損傷后ld、3d、7d、14d各時間點過氧化物酶增殖性受體PPARTmRNA表達明顯高于正常對照組(p<0.05)。大鼠脊髓損傷后ld可見PPARγ表達的陽性細胞明顯增多，在損傷后3d陽性細胞數(shù)達到高峰。正常組織中過氧化物酶體增殖激活型受體γ蛋白表達很弱。脊髓損傷組PPARγ蛋白表

5、達較假手術(shù)組明顯增高。但損傷后7d、14d的表達值仍高于假手術(shù)組。結(jié)論：正常組織中PPARγ表達很弱。脊髓損傷后PPARγ表達增加，與脊髓損傷時間之間存在時效關(guān)系，將PPARγ作為一靶點，利用其激活劑對其進行干預(yù)可以對脊髓損傷產(chǎn)生保護作用。
　　 第二部分PPARγ受體激動劑對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)細胞凋亡的影響
　　 目的：觀察PPARγ受體激動劑對大鼠脊髓損傷后細胞凋亡的影響。方法：10周齡SPF級120只SD大鼠隨機分

6、為對照組和損傷組，干預(yù)組。對照組大鼠，僅做椎板切除術(shù)，損傷組采用改良Allen法制作大鼠急性脊髓損傷(SCI)模型。干預(yù)組損傷模型成功后，通過腹腔注射PPARγ受體激動劑羅格列酮(2mg/kg)。分別于傷后ld、3d、7d、14d(每時間點10只)處死取材對脊髓損傷區(qū)進行HE染色，透射電鏡，細胞凋亡TUNEL標(biāo)記，DNAladder，RT-PCR和Western檢測bax，bcl-2的表達變化，同時采用BBB評分方法觀察神經(jīng)功能恢復(fù)情況