自噬在機械通氣所致大鼠呼吸機相關(guān)性肺損傷中的作用及意義.pdf

1、本文主要從以下幾方面展開論述：
　　第一部分:大鼠機械通氣所致呼吸機相關(guān)性肺損傷模型的建立。
　　目的：
　　建立大鼠機械通氣所致相關(guān)性肺損傷的動物模型，研究不同潮氣量機械通氣對大鼠肺組織的影響情況。
　　方法：
　　健康雄性SPF級SD大鼠30只，周齡7周，體重(220±20g)，實施麻醉和氣管切開術(shù)后分別接受不同潮氣量(VT)的通氣(通氣時間均為4h)。隨機分為以下3組:對照組（A組，僅行氣管插管并保留

2、自主呼吸）;常規(guī)通氣組（B組，VT=10ml/kg）;損傷通氣組(C組，VT=40ml/kg)。A組在氣管插管后即刻，其他組在機械通氣結(jié)束后放血處死動物，計算肺濕/干比重比值（W/D比值），HE染色觀察肺組織病理學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　在大潮氣量機械通氣4h后，光鏡下病理學(xué)檢查結(jié)果顯示A、B組病理形態(tài)大致正常，C組肺組織中可見肺泡間隔增寬，肺泡腔滲液明顯增加，其內(nèi)可見炎性細胞浸潤并有大量散在出血點;與A、B相比，C組肺組織

3、W/D比值明顯增加(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　大潮氣量機械通氣能夠誘導(dǎo)大鼠呼吸機相關(guān)性肺損傷的發(fā)生，通過肺組織濕干比重和肺組織病理學(xué)檢查提示復(fù)制大鼠呼吸機相關(guān)性肺損傷動物模型成功。
　　第二部分:自噬在機械通氣所致大鼠呼吸機相關(guān)性肺損傷過程中的作用及意義。
　　目的：
　　評價機械通氣相關(guān)性所致肺損傷(VILI)過程中自噬相關(guān)蛋白Beclin1、LC3和炎癥相關(guān)因子NF-κB表達的意義。
　　

4、方法：
　　健康雄性SPF級SD大鼠30只，周齡7周，體重（200-250g），實施麻醉和氣管插管術(shù)后分別接受不同潮氣量(VT)的通氣（通氣時間均為4h）。隨機分為以下3組:對照組（A組，僅行氣管插管并保留自主呼吸）;常規(guī)通氣組(B組，VT=10ml/Kg);損傷通氣組(C組，VT=40ml/Kg)。A組在氣管插管并自主呼吸4h后，其他組在機械通氣結(jié)束后放血處死動物，計算BALF中白細胞計數(shù)(WBC)和總蛋白含量，ELISA試劑盒

5、檢測BALF中炎癥因子TNF-α和IL-1β的含量，使用MPO、SOD及MDA試劑盒檢測肺組織勻漿中相應(yīng)指標的表達水平，Western Blot法檢測肺組織中自噬相關(guān)基因Beclin1、LC3及NF-κB的表達水平。
　　結(jié)果：
　　在大潮氣量機械通氣4h后，肺組織中總蛋白含量、白細胞計數(shù)和MPO、MDA等指標均顯著增加(P＜0.05)，SOD含量明顯降低(P＜0.05);肺組織中Beclin1、LC3、NF-κB表達水平均