幽門(mén)螺桿菌cagA基因的克隆、表達(dá)、免疫原性測(cè)定及其對(duì)胃上皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、中南大學(xué)碩士學(xué)位論文幽門(mén)螺桿菌cagA基因的克隆、表達(dá)、免疫原性測(cè)定及其對(duì)胃上皮細(xì)胞凋亡的影響姓名：陳雄申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：徐燦霞20080501碩士學(xué)位論文 中文摘要第二章 幽門(mén)螺桿菌o a g A 基因在胃上皮細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響目的：構(gòu)建含c a g A 基因的真核表達(dá)載體，并在胃上皮細(xì)胞G E S - 1中表達(dá)，觀察其表達(dá)和定位情況及其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。方法：將合成的c a g A 基因片段從p

2、u c 5 7 - c a g A 質(zhì)粒中切出，分別克隆至綠色熒光蛋白表達(dá)載體p E G F P - C 1 及表達(dá)載體p C D N A 3 ．1- h i s ／m y c - A ，用脂質(zhì)體法分別將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)染入胃上皮細(xì)胞G E S - 1 中，用熒光顯微鏡觀察其在G E S - 1 細(xì)胞中的表達(dá)及定位，用熒光實(shí)時(shí)定量P C R 及W e s t e r n - b l o t 檢測(cè)c a g A 基因在細(xì)胞中的表達(dá)情況。用流

3、式細(xì)胞儀觀察C a g A 蛋白對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果：1 ．成功構(gòu)建p E G F P - C I - c a g A 和p C D N A 3 ．卜h i s ／m y c —A —c a g A真核表達(dá)質(zhì)粒，目的基因的測(cè)序結(jié)果與設(shè)計(jì)的序列完全一致。2 ．綠色熒光蛋白表達(dá)質(zhì)粒p E G F P - C 卜c a g A 轉(zhuǎn)染G E S - 1 后，其表達(dá)分布于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中。3 ．表達(dá)質(zhì)粒p C D N A 3 ．卜h i s ／

4、m y c —A —c a g A 轉(zhuǎn)染G E S - 1 細(xì)胞后，c a g A 基因在細(xì)胞中獲得了表達(dá)。4 ．轉(zhuǎn)染p C D N A 3 ．1．h i s ／m y c —A —c a g A 的G E S - 1 細(xì)胞行流式細(xì)胞儀分析示C a g A 蛋白有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)論：1 ．成功構(gòu)建幽門(mén)螺桿菌c a g A 基因的真核表達(dá)質(zhì)粒，并在胃上皮細(xì)胞株G E S - 1 中獲得了表達(dá)，且在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)均有表達(dá)。2 ．經(jīng)流