幽門螺桿菌cagA基因的克隆、表達、免疫原性測定及其對胃上皮細胞凋亡的影響.pdf

1、中南大學碩士學位論文幽門螺桿菌cagA基因的克隆、表達、免疫原性測定及其對胃上皮細胞凋亡的影響姓名：陳雄申請學位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學指導教師：徐燦霞20080501碩士學位論文 中文摘要第二章 幽門螺桿菌o a g A 基因在胃上皮細胞中的表達及其對細胞凋亡的影響目的：構(gòu)建含c a g A 基因的真核表達載體，并在胃上皮細胞G E S - 1中表達，觀察其表達和定位情況及其對細胞凋亡的影響。方法：將合成的c a g A 基因片段從p

2、u c 5 7 - c a g A 質(zhì)粒中切出，分別克隆至綠色熒光蛋白表達載體p E G F P - C 1 及表達載體p C D N A 3 ．1- h i s ／m y c - A ，用脂質(zhì)體法分別將重組表達載體轉(zhuǎn)染入胃上皮細胞G E S - 1 中，用熒光顯微鏡觀察其在G E S - 1 細胞中的表達及定位，用熒光實時定量P C R 及W e s t e r n - b l o t 檢測c a g A 基因在細胞中的表達情況。用流

3、式細胞儀觀察C a g A 蛋白對細胞凋亡的影響。結(jié)果：1 ．成功構(gòu)建p E G F P - C I - c a g A 和p C D N A 3 ．卜h i s ／m y c —A —c a g A真核表達質(zhì)粒，目的基因的測序結(jié)果與設(shè)計的序列完全一致。2 ．綠色熒光蛋白表達質(zhì)粒p E G F P - C 卜c a g A 轉(zhuǎn)染G E S - 1 后，其表達分布于細胞質(zhì)和細胞核中。3 ．表達質(zhì)粒p C D N A 3 ．卜h i s ／

4、m y c —A —c a g A 轉(zhuǎn)染G E S - 1 細胞后，c a g A 基因在細胞中獲得了表達。4 ．轉(zhuǎn)染p C D N A 3 ．1．h i s ／m y c —A —c a g A 的G E S - 1 細胞行流式細胞儀分析示C a g A 蛋白有促進細胞凋亡的作用。結(jié)論：1 ．成功構(gòu)建幽門螺桿菌c a g A 基因的真核表達質(zhì)粒，并在胃上皮細胞株G E S - 1 中獲得了表達，且在細胞質(zhì)和細胞核內(nèi)均有表達。2 ．經(jīng)流