山茱萸總皂苷對(duì)白血病K562細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:觀察山茱萸總皂苷對(duì)人白血病K562細(xì)胞增殖影響，分析山茱萸總皂苷對(duì)K562細(xì)胞凋亡的影響及其分子機(jī)制，為進(jìn)一步探討TSCO抗腫瘤提供參考依據(jù)。
　　方法:
　?。?）乙醇回流法提取山茱萸總皂苷，HPD-100大孔吸附樹(shù)脂對(duì)提取液純化；
　?。?）MTT法觀察 TSCO對(duì)體外培養(yǎng)的K562細(xì)胞的增殖抑制作用；
　?。?） Hoechst33342/PI熒光染色法，DNA瓊膠糖凝膠電泳法檢測(cè)TSCO對(duì)K562細(xì)

2、胞的誘導(dǎo)凋亡作用；
　?。?）比色法測(cè)定凋亡相關(guān)蛋白Caspase3活性；Western Blot法檢測(cè)K562細(xì)胞Bax和Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　?。?）山茱萸總皂苷能夠顯著抑制K562細(xì)胞的增殖，且隨著藥物濃度（12.5、25、50、100和200μg/mL）增大和培養(yǎng)時(shí)間（24h、48h和72h）的延長(zhǎng)，山茱萸總皂苷對(duì)K562細(xì)胞活性的抑制作用逐漸增強(qiáng)；
　　（2）12.5、25、50、1

3、00和200μg/mL的山茱萸總皂苷處理72h后，K562細(xì)胞出現(xiàn)典型凋亡的三期形態(tài)學(xué)改變，可見(jiàn)胞體縮小、核染色質(zhì)聚集、胞漿濃縮、核固縮、核碎裂,還可見(jiàn)膜包裹的凋亡小體；測(cè)得細(xì)胞凋亡率隨著藥物的濃度的增大而升高；
　?。?）DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示：12.5、25、50、100和200μg/mL山茱萸總皂苷作用K562細(xì)胞72h后，可誘導(dǎo)K562細(xì)胞產(chǎn)生凋亡細(xì)胞的DNA梯形條帶；
　?。?）酶標(biāo)法檢測(cè)到TSCO作用72h后，

4、K562細(xì)胞的Caspase-3活性明顯增高；
　?。?）Western-blot顯示：12.5、25、50、100和200μg/mL山茱萸總皂苷作用K562細(xì)胞72h后，Bax的表達(dá)升高、Bcl-2的表達(dá)下降。
　　結(jié)論:
　?。?）山茱萸總皂苷能抑制K562細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)K562細(xì)胞凋亡；在一定劑量范圍內(nèi)，山茱萸總皂苷的作用隨著作用時(shí)間和藥物濃度的增加而增強(qiáng)；
　?。?）山茱萸總皂苷誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的作用