葛根素干預(yù)核因子-κB防治動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、葛根素(Puerarin，Pue)是野生植物葛根中異黃酮的主要有效成分之一，研究表明葛根素具有多種生化和藥理活性例如降低膽固醇、抗氧化應(yīng)激、抗腫瘤、改善胰島素抵抗等作用。然而，葛根素干預(yù)NF-κB的活化對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子及高脂飲食所致動(dòng)脈粥樣硬化的影響未見(jiàn)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)則是研究葛根素干預(yù)NF-κB的活化對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子及高脂飲食所致主動(dòng)脈壁動(dòng)脈粥樣硬化的影響，探討葛根素防治動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制。本研究分為兩個(gè)部分：

2、
　　 第一部分：葛根素通過(guò)調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路抑制TNF-Q誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子。
　　 目的：通過(guò)研究葛根素對(duì)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)與NF-κB活化的影響，探討葛根素調(diào)控炎癥狀態(tài)下內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子的機(jī)制。
　　 方法：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，分為對(duì)照組、TNF-α組、葛根素低、中、高濃度組(10，20，50μmol/ml)。不同濃度的葛根素和內(nèi)皮細(xì)胞

3、預(yù)孵育后加入TNF-α進(jìn)行刺激。應(yīng)用Westernblot與CELL-ELISA分別檢測(cè)各組細(xì)胞漿蛋白與細(xì)胞上黏附分子的水平；應(yīng)用Westernblot檢測(cè)各組細(xì)胞漿蛋白IκB-α及各組細(xì)胞核內(nèi)和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)NF-κB p65水平。
　　 結(jié)果：葛根素呈濃度依賴性抑制TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞漿蛋白與細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá)；另外，葛根素呈濃度依賴性抑制TNF-α誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞漿蛋白IκB-α降低及核蛋白NF-κB p65增加。

4、>　　 結(jié)論：葛根素能夠抑制TNF-α誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的黏附分子的表達(dá)，可能與其抑制NF-κB活化有關(guān)，提示其具有抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
　　 第二部分：葛根素通過(guò)干預(yù)兔主動(dòng)脈壁NF-κB活化抑制其表達(dá)黏附分子和改善動(dòng)脈粥樣硬化。
　　 目的：葛根素對(duì)高脂飲食兔主動(dòng)脈壁組織的核因子-κB(NF-κB)活化的影響及黏附分子的表達(dá)，探討葛根素抗動(dòng)脈粥樣硬化的機(jī)制。
　　 方法：24只新西蘭兔分為3組：⑴正常飲食

5、組；⑵高脂飲食組；⑶葛根素干預(yù)組：高脂飲食同時(shí)給予注射葛根素。ELISA檢測(cè)各組0、8、16周的血漿黏附分子水平。16周后動(dòng)物被處死，肉眼和光鏡下觀測(cè)各組主動(dòng)脈壁的病理學(xué)變化，免疫組化和PCR分別檢測(cè)主動(dòng)脈壁黏附分子的蛋白質(zhì)和mRNA的表達(dá)，Westernblot檢測(cè)主動(dòng)脈壁組織中磷酸化抑制因子-α(p-I-κB)與NF-κB抑制因子-α(I-κB-α)蛋白質(zhì)的表達(dá)，ELISA檢測(cè)主動(dòng)脈壁組織勻漿中NF-κB p65的水平。
　　

6、 結(jié)果：與正常飲食組比較，高脂飲食引起兔主動(dòng)脈壁顯著的動(dòng)脈粥樣硬化，組織中和血清中的黏附分子表達(dá)明顯增高，主動(dòng)脈壁組織p-IκB-α顯著增加，IκB-α顯著減少，同時(shí)伴有主動(dòng)脈壁組織核內(nèi)NF-κB p56的水平增加；葛根素能明顯抑制高脂飲食引起兔的主動(dòng)脈壁和血清中的黏附分子主動(dòng)脈壁的動(dòng)脈粥樣硬化，同時(shí)其能抑制主動(dòng)脈壁組織中p-IκB-α的增加和IκB-α的減少，同時(shí)抑制主動(dòng)脈壁細(xì)胞的NF-κBp56核內(nèi)轉(zhuǎn)移。
　　 結(jié)論：NF