脂聯(lián)素對糖尿病動脈粥樣硬化的干預研究.pdf

1、第一部分脂聯(lián)素對血管內(nèi)皮細胞炎癥反應的影響 目的：初步探討脂聯(lián)素對血管內(nèi)皮細胞炎癥反應的影響及其機制。 方法：培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(HUVEC)，按照隨機化原則分組：①正常對照組；②TNF-α損傷組：每組HUVEC分別加入不同濃度的TNF-α(0、10、20、50ng/ml)刺激6h；③TNF-α+PDTC組：不同濃度的PDTC(10、50、100μmol/L)預處理HUVEC 1h，再加入TNF-a，濃度為20ng/

2、ml，繼續(xù)培養(yǎng)6h；④TNF-α+脂聯(lián)素組：不同濃度的脂聯(lián)素(12.5、25、50μg/ml)，培養(yǎng)HUVEC 16h，再加入TNF-a，濃度為10ng/ml，繼續(xù)培養(yǎng)6h。采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測細胞上清MCP-1濃度。 結(jié)果：HUVEC與不同濃度的TNF-a共同孵育6h后其MCP-1的表達水平明顯高于對照組(P<0.01)；HUVEC首先經(jīng)不同濃度的PDTC預處理1h，然后再與TNF-a(20ng/ml)共同孵

3、育6h，與單純TNF-a刺激組相比，其MCP-1的表達水平明顯降低(P<0.01)。HUVEC首先經(jīng)不同濃度的脂聯(lián)素預處理16h后再與TNF-a(10ng/ml)共同孵育6h，與單純TNF-a刺激組相比，低濃度(12.5μg/ml)脂聯(lián)素不能抑制TNF-a介導的內(nèi)皮細胞MCP-1表達(P>0.05)，當脂聯(lián)素的濃度達到25μg/ml時，脂聯(lián)素可明顯的抑制TNF-a介導的內(nèi)皮細胞MCP-1表達(P<0.01)。 結(jié)論：脂聯(lián)素可以通

4、過抑制血管內(nèi)皮細胞某些炎癥因子的表達水平來改善血管內(nèi)皮的炎癥反應狀態(tài)，從而發(fā)揮其抗炎抗動脈粥樣硬化作用。 第二部分2型糖尿病大鼠血清脂聯(lián)素水平的研究 目的：探討血清脂聯(lián)素水平與2型糖尿病的關(guān)系。 方法：清潔級健康雄性Wistar大鼠，平均體重為206.35±12.48g，隨機分為正常對照組和糖尿病組，普通飼料適應性喂養(yǎng)2周后，正常組大鼠繼續(xù)給予普通飼料喂養(yǎng)，糖尿病組大鼠則給予含3％膽固醇的高脂飼料喂養(yǎng)。4周后，糖

5、尿病組大鼠按30mg/kg單次腹腔注射鏈脲佐菌素，72小時后尾靜脈采血測血糖，以血糖濃度>16.7mmol/L，作為2型糖尿病模型診斷標準。高脂高膽固醇飼料繼續(xù)喂養(yǎng)12周后結(jié)束實驗。ELISA法檢測大鼠血清脂聯(lián)素及血清sICAM-1水平；免疫比濁法檢測血清CRP水平；化學法檢測血脂水平。 結(jié)果：糖尿病組大鼠與正常對照組大鼠相比，血糖、TC、TG、LDL-C、CRP及sICAM-1水平顯著升高(P<0.05)；HDL-C水平顯著降

6、低(P<0.05)。提示高脂高膽固醇飲食聯(lián)合小劑量STZ建立的2型糖尿病模型存在明顯的高血糖、血脂代謝紊亂及高炎癥反應狀態(tài)。相關(guān)性分析顯示血清脂聯(lián)素水平與TC、TG、LDL-C及CRP負相關(guān)(P<0.05)；與HDL-C正相關(guān)(P<0.05)；與血清sICAM-1無明顯相關(guān)性(P>0.05)。提示循環(huán)低脂聯(lián)素水平與動脈粥樣硬化密切相關(guān)。 結(jié)論：糖尿病大鼠血清脂聯(lián)素水平顯著低于正常大鼠，低脂聯(lián)素血癥與2型糖尿病特別是糖尿病大血管病

7、變的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。 第三部分脂聯(lián)素對糖尿病大鼠動脈粥樣硬化早期階段的干預研究 目的：探討提高血漿脂聯(lián)素濃度能否改善糖尿病大鼠動脈粥樣硬化早期階段的炎癥反應。 方法：采用AdEasy<'TM>系統(tǒng)構(gòu)建表達人全長脂聯(lián)素蛋白的重組腺病毒載體。重組腺病毒進行鑒定、擴增后，測定病毒滴度。高脂高膽固醇喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量STZ建立2型糖尿病大鼠模型，隨機分為2組：(1)糖尿病組：糖尿病大鼠給予高脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)16周；(2)

8、脂聯(lián)素干預組：糖尿病大鼠給予高脂高膽固醇喂養(yǎng)14周后，尾靜脈注射表達人脂聯(lián)素的重組腺病毒載體，病毒滴度為2×10<'8>pfu，繼續(xù)高脂高膽固醇喂養(yǎng)2周。ELISA法檢測血漿脂聯(lián)素及細胞間黏附分子水平；免疫比濁法測定血清C-反應蛋白水平；RT-PCR及實時熒光定量PCR法檢測大鼠主動脈組織MCP-1、ICAM-1及VCAM-1的mRNA表達水平；化學發(fā)檢測血脂及血糖水平。 結(jié)果：高脂高膽固醇聯(lián)合小劑量STZ法成功建立2型糖尿病動

9、物模型，其血糖、TC及TG水平分別達到7.46±1.73mmol/L、206.88±28.62mg/dL 及65.52±18.59mg/dL，顯著高于正常大鼠(P<0.05)。尾靜脈注射表達脂聯(lián)素的重組腺病毒14天后，血清人脂聯(lián)素水平達到68.4±19.2μg/mL，而糖尿病組大鼠血清沒有檢測出人脂聯(lián)素蛋白。但脂聯(lián)素干預組與糖尿病組相比，血糖、血脂水平?jīng)]有顯著性差異(P>0.05)。脂聯(lián)素干預組血清可溶性細胞間黏附分子和C-反應蛋白水平