ABCB11和ATP8B1基因突變?cè)诘虶GT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥中的意義.pdf

1、肝內(nèi)膽汁淤積性肝病是兒童期肝病的重要類(lèi)型,大部分預(yù)后良好,但也有少數(shù)會(huì)持續(xù)進(jìn)展為肝硬化和肝功能衰竭。進(jìn)行性家族性肝內(nèi)膽汁淤積癥(Progressive Familial Intrahepatic Cholestasis,PFIC)是導(dǎo)致部分肝內(nèi)膽汁淤積患兒肝病持續(xù)進(jìn)展的重要原因之一。臨床上根據(jù)GGT水平是否升高可分為正?；虻虶GT和伴GGT水平升高兩種臨床表型。近年來(lái),基于分子醫(yī)學(xué)的進(jìn)步已明確表現(xiàn)為正?；虻虶GT的PFIC至少又可分為兩

2、種:由ATP8B1基因突變引起的PFIC1和由ABCB11基因突變引起的PFIC2。此外,這兩種基因也分別是引起良性再發(fā)性肝內(nèi)膽汁淤積癥(Benign Recurrent Intrahepatie Cholestasis,BRIC)1型和2型的致病基因。PFIC1和PFIC2的臨床表現(xiàn)類(lèi)似,如新生兒期或嬰兒期起病,臨床表現(xiàn)為黃疸、瘙癢、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩,血生化表現(xiàn)為結(jié)合膽紅素、轉(zhuǎn)氨酶、膽汁酸升高,GGT始終在正常范圍等。且這兩種疾病發(fā)展均較

3、迅速,大多數(shù)患兒在成人之前會(huì)發(fā)展為肝硬化和肝功能衰竭。目前基因分析是鑒別這兩種疾病最好的方法。
　　 ATP8B1基因位于人類(lèi)染色體18q21-22,編碼P4P型ATP酶,即FIC1蛋白,該蛋白在人體的多個(gè)器官包括肝臟、胰腺和小腸等均有表達(dá)。ATP8B1基因突變所致的FIC1蛋白缺陷引起PFIC1的機(jī)制目前還不清楚。ABCB11基因位于人類(lèi)染色體2q24-31,編碼ATP依賴(lài)性膽鹽輸出泵(Bile Salt Export Pum

4、p,BSEP),該蛋白是將膽鹽由肝細(xì)胞排入毛細(xì)膽管的主要載體,是形成膽汁流的重要驅(qū)動(dòng)力,在人類(lèi)尚未發(fā)現(xiàn)替代途徑存在。ABCB11基因突變導(dǎo)致的BSEP蛋白缺陷會(huì)使膽鹽分泌障礙,淤積于肝細(xì)胞內(nèi)的膽汁酸會(huì)對(duì)肝臟產(chǎn)生毒害作用。ATP8B1和ABCB11基因突變引起的PFIC在美國(guó)、歐洲、阿拉伯地區(qū)及我國(guó)臺(tái)灣均有病例報(bào)道,但在中國(guó)大陸還未曾見(jiàn)過(guò)報(bào)道。在中國(guó)大陸肝內(nèi)膽汁淤積癥患兒中是否存在ATP8B1和ABCB11基因突變還不清楚。本研究的目的是

5、明確這兩種基因突變?cè)谥袊?guó)大陸臨床表現(xiàn)為低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒中是否存在并明確其突變特征。
　　 第一部分
　　 ABCB11基因突變?cè)诘虶GT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥中的意義
　　 目的：明確ABCB11基因突變?cè)谥袊?guó)大陸低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥中是否存在及其突變特征。
　　 方法：2004.1至2007.7,復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院兒童肝病中心診治的24例臨床表現(xiàn)為低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒為研

6、究對(duì)象。通過(guò)PCR和直接測(cè)序的方法對(duì)這部分患兒ABCB11基因27個(gè)參與蛋白編碼的外顯子及鄰近序列進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)復(fù)習(xí)病史分析患兒的肝臟病理和臨床表現(xiàn)。
　　 結(jié)果：7例患兒檢測(cè)到ABCB11基因突變,共12個(gè)突變位點(diǎn)。其中包括3個(gè)無(wú)義突變、6個(gè)錯(cuò)義突變、2個(gè)剪切位點(diǎn)突變和1個(gè)發(fā)生在內(nèi)含子區(qū)的突變,且這12個(gè)突變均是文獻(xiàn)上未曾見(jiàn)報(bào)道的新突變。這24例患兒中16例曾做過(guò)肝穿刺活檢,其中4例檢測(cè)到ABCB11基因突變,且這4例患兒均表

7、現(xiàn)出肝細(xì)胞巨細(xì)胞樣變。12例沒(méi)有檢測(cè)到ABCB11基因突變的患兒中3例表現(xiàn)出肝細(xì)胞巨細(xì)胞樣變。
　　 結(jié)論：ABCB11基因突變是導(dǎo)致本組患兒發(fā)生低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥的重要原因,且突變特征與國(guó)外不同。肝細(xì)胞巨細(xì)胞樣變是ABCB11基因突變患兒區(qū)別于其他患兒的主要肝臟病理表現(xiàn)。肝臟病理學(xué)檢查有助于診斷PFIC2,確診還需進(jìn)行基因檢測(cè)。
　　 第二部分
　　 ATP8B1基因突變?cè)诘虶GT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥

8、中的意義
　　 目的：明確在中國(guó)大陸臨床表現(xiàn)為低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒中是否存在ATP8B1基因突變及其突變特征。
　　 方法：2004.1至2007.7,復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院兒童肝病中心診治的24例臨床表現(xiàn)為低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒為研究對(duì)象。其中5例因檢測(cè)到存在ABCB11基因純合或復(fù)合雜合突變而排除在外,對(duì)剩余19例無(wú)或僅存在一個(gè)ABCB11基因突變位點(diǎn)患兒的ATP8B1基因所有參與蛋白編碼的外顯子及鄰

9、近序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增并直接測(cè)序。復(fù)習(xí)病史比較ABCB11基因突變患兒及ATP881基因突變患兒的肝臟病理表現(xiàn)。
　　 結(jié)果：共在9例患兒中檢測(cè)到10種ATP8B1基因突變類(lèi)型。除錯(cuò)義突變I694N和無(wú)義突變R952X外其余均為新發(fā)現(xiàn)的突變類(lèi)型。在9例ATPSB1基因突變患兒中4例檢測(cè)到P209T和IVS6+5T＞G連鎖突變,其中2例純合子,2例雜合子。9例檢測(cè)到ATP8B1基因突變的患兒中5例曾做過(guò)肝臟病理學(xué)檢查,淤膽但不伴肝細(xì)

10、胞的巨細(xì)胞樣變是這些患兒的共同病理特征。
　　 結(jié)論：在中國(guó)大陸臨床表現(xiàn)為低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積患兒中存在ATP8B1基因突變。連鎖突變P209T和IVS6+5T＞G是該組研究對(duì)象的熱點(diǎn)突變類(lèi)型。與ABCB11基因突變患兒相比,ATP8B1基因突變患兒的肝臟病理很少出現(xiàn)肝細(xì)胞巨細(xì)胞變。
　　 總結(jié)：
　　 1.ABCB11和ATP8B1基因突變是導(dǎo)致本組患兒發(fā)生低GGT進(jìn)行性肝內(nèi)膽汁淤積癥的重要原因。