VASH1和VEGFR-2在宮頸鱗癌組織的表達及意義.pdf

1、近年來，發(fā)病率較高的宮頸癌一直困擾著廣大女性的身心健康，這逐漸引起世界醫(yī)學領域的重視和研究。全世界每年新增宮頸癌病例約53萬，占所有新增女性腫瘤病例的12％，而85%的新發(fā)病例發(fā)生于欠發(fā)達國家。雖然近些年宮頸癌的診斷、治療及預防水平均有所提高，但總體看來，宮頸癌的發(fā)病率和死亡率仍無明顯下降。宮頸癌的發(fā)生與發(fā)展是多因素參與、多步驟演變的病理過程，血管新生在宮頸癌的生長和轉移過程中發(fā)揮關鍵性作用，而新血管的形成是一個復雜的過程，受多種因子的

2、調控，通過某種途徑抑制腫瘤血管生成逐漸成為國內外學者抗腫瘤研究的焦點。
　　血管內皮生長因子（VEGF）是最重要的促血管生長因子，在血管形成的調節(jié)過程中發(fā)揮極其關鍵的作用，血管內皮生長因子受體-2（VEGFR-2）是VEGF調控血管新生的主要酪氨酸激酶功能受體，它主要表達于血管內皮細胞，主要功能是各種生理、病理情況下介導新生血管的形成。
　　血管生成抑制蛋白VASH1（vasohibin-1）最初是Watanabe K等通過

3、DNA微陣列分析在人臍靜脈內皮細胞中發(fā)現(xiàn)的一種非傳統(tǒng)型分泌蛋白，也是至今發(fā)現(xiàn)的第一個被VEGF、成纖維生長因子-2（FGF-2）誘導的負反饋調節(jié)因子。VASH1不僅參與調節(jié)人體的正常生理功能，還與許多腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關。研究證實VEGF與其受體VEGFR-2結合后，激活下游PKC-δ信號通路，進而促進內皮細胞VASH1的表達。VASH1具有抑制血管生成、抑制淋巴結轉移及誘導細胞凋亡的功能。
　　本研究試圖通過檢測VASH1和VEG

4、FR-2在不同宮頸病變組織中的表達變化，探討兩者在宮頸鱗癌發(fā)病機制中的作用，也為宮頸癌的臨床診斷和治療提供新的理論基礎。
　　目的:本實驗采用免疫組化和熒光定量PCR法檢測VASH1和VEGFR-2在宮頸鱗癌組織、宮頸CIN組織及正常宮頸組織中的表達情況，分析VASH1、VEGFR-2在宮頸鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用及二者的相關性，為宮頸癌的早期診斷、創(chuàng)新性治療研究提供新的參考依據。
　　材料與方法:
　　1．實驗對象：收集

5、2013年9月-2014年11月于鄭州大學第三附屬醫(yī)院門診或住院手術治療切除的宮頸組織標本90例，其中正常宮頸組織20例（年齡32～67歲，平均45.6歲），宮頸CIN組織25例（年齡30～64歲，平均42.2歲），宮頸鱗癌組織45例（年齡30～70歲，平均46.1歲），其中18例鱗癌發(fā)生淋巴結轉移，無淋巴結轉移者27例；按FIGO臨床分期：I期18例，II期16例，III期11例；病理組織學分級：G1級19例，G2級13例，G3級13

6、例。所有標本常規(guī)取材，一部分經10%甲醛固定、石蠟包埋、4μm厚度常規(guī)切片，另一部分快速置于液氮中-80℃冰箱保存。所有患者術前均無放療、化療及免疫治療史，術后病理結果均由病理醫(yī)師嚴格確診。
　　2．實驗方法：分別采用免疫組化和熒光定量PCR法檢測VASH1和VEGFR-2在正常宮頸組織、CIN和宮頸鱗癌組織中的表達情況，嚴格按照實驗試劑盒說明書操作。
　　3．統(tǒng)計方法：采用SPSS17.0軟件統(tǒng)計，定性資料比較采用χ2檢驗

7、、Fisher確切概率法，定量資料結果以-x±s表示，各組間比較采用單因素方差分析、t檢驗、LSD-t檢驗等，VASH1和VEGFR-2相關性分析采用Pearson相關分析。檢驗水準α=0.05。
　　結果:
　　1．免疫組化結果：VASH1蛋白和VEGFR-2蛋白均主要在細胞質（膜）中表達。VASH1在宮頸鱗癌、宮頸CIN及正常宮頸三組中的表達率分別為75.6%、44.0%和15.0%，差異有統(tǒng)計學意義；VEGFR-2在宮

8、頸鱗癌、宮頸CIN及正常宮頸三組中的表達率分別為66.7%、40.0%和10.0%，差異有統(tǒng)計學意義。
　　2．熒光定量PCR結果：VASH1 mRNA在正常宮頸、宮頸CIN及宮頸鱗癌中的相對表達量分別為1.000±0.000、4.365±2.068和15.509±1.657，差異有統(tǒng)計學意義；VEGFR-2 mRNA在正常宮頸、宮頸CIN及宮頸鱗癌中的相對表達量分別為1.000±0.000、3.978±1.968和22.880±

9、1.232，差異有統(tǒng)計學意義。
　　3．VASH1和VEGFR-2與宮頸鱗癌患者年齡的關系:VASH1在年齡≥40歲和<40歲兩組的蛋白表達率為80.0%、66.7%（P>0.05）；mRNA相對表達量為16.959±1.709、12.969±1.483(P>0.05）。
　　VEGFR-2在年齡≥40歲和<40歲兩組的蛋白表達率為70.0%、53.3%（P>0.05）；mRNA相對表達量為26.723±3.392、16.7

10、26±1.554（P>0.05）。宮頸鱗癌中VASH1和VEGFR-2的表達與患者年齡無明顯相關性。
　　4．VASH1和VEGFR-2與宮頸鱗癌淋巴結轉移的關系:VASH1在淋巴結轉移組的蛋白表達率為94.4%，mRNA相對表達量為21.676±1.865，明顯高于無轉移組63.0%，12.406±1.247，差異均有統(tǒng)計學意義。
　　VEGFR-2在淋巴結轉移組的蛋白表達率為83.3%，mRNA相對表達量為42.814±

11、2.916,明顯高于無轉移組51.9%，15.043±2.239，差異均有統(tǒng)計學意義。
　　5．VASH1和VEGFR-2與宮頸鱗癌臨床分期的關系:VASH1在Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期中蛋白表達率分別是64.5%、100.0%（P<0.05）；mRNA相對表達量分別為13.501±1.300、23.802±2.208（P<0.05），差異均有統(tǒng)計學意義。
　　VEGFR-2在Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ期中蛋白表達率分別是51.6%、92.9%（P<

12、0.05）；mRNA相對表達量分別為18.026±2.521、47.604±3.006（P<0.05），差異均有統(tǒng)計學意義。
　　6．VASH1和VEGFR-2與宮頸鱗癌病理學分級的關系:VASH1在G1～G2級、G3級兩組中的蛋白表達率為71.9%、84.6%（P>0.05）；mRNA相對表達量分別為14.400±1.257、18.726±2.742(P>0.05),差異無明顯統(tǒng)計學意義。
　　VEGFR-2在G1～G2級

13、、G3級兩組中的蛋白表達率為53.1%、92.3%（P<0.05）；mRNA相對表達量分別為14.805±1.617、66.579±3.653（P<0.05），差異均有統(tǒng)計學意義。
　　7．宮頸鱗癌中VASH1和VEGFR-2的相關性:免疫組化結果：VASH1和VEGFR-2在宮頸鱗癌中的表達呈正相關。熒光定量 PCR結果：VASH1和VEGFR-2在宮頸鱗癌中的表達呈正相關。
　　結論:
　　1.VASH1和VEGF