抗凝血酶編碼基因變異與中國(guó)人群靜脈血栓栓塞癥的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、靜脈血栓栓塞癥（VTE）是指由于遺傳性因素或獲得性因素引起血栓形成和血栓栓塞的一類疾病。它是一種危害人類健康和生命的常見疾病，其臨床表現(xiàn)主要形式為下肢深靜脈血栓形成和肺血栓栓塞癥，也可少見于上肢靜脈、顱內(nèi)靜脈竇、視網(wǎng)膜靜脈和腸系膜靜脈等部位。
　　靜脈血栓栓塞癥有著較高的發(fā)病率和死亡率，近年荷蘭一項(xiàng)針對(duì)近5000名靜脈血栓栓塞患者長(zhǎng)達(dá)八年的隨訪研究顯示，其年死亡率約為22.7/1000，為正常人群年死亡率的4倍，且死亡風(fēng)險(xiǎn)在血栓形

2、成后8年內(nèi)無(wú)下降趨勢(shì)。此 VTE可導(dǎo)致患肢長(zhǎng)期處于肢體腫痛狀態(tài)并可引起淺靜脈曲張甚至潰瘍，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。人體的凝血系統(tǒng)平衡是由凝血機(jī)制與抗凝機(jī)制兩方面構(gòu)成，VTE是由于人體內(nèi)凝血系統(tǒng)和抗凝血系統(tǒng)失衡導(dǎo)致的。在病理情況下，遺傳性或獲得性抗凝血因子缺陷會(huì)導(dǎo)致凝血與抗凝失衡，血液處于高凝狀態(tài)，血栓形成風(fēng)險(xiǎn)增加。常見的遺傳性靜脈血栓栓塞癥有遺傳性蛋白 S缺乏癥、遺傳性蛋白 C缺乏癥、遺傳性抗凝血酶缺乏癥和凝血因子 V Leiden及凝

3、血酶原20210A以及在中國(guó)人群中發(fā)現(xiàn)的優(yōu)勢(shì)突變或基因多態(tài)性：THBD c.-151G>T，PROCc.574_576del，PROCc.565C>T，APOHg.5028C>A、c.422T>C、c.461G>A、c.1004G>C等。靜脈血栓栓塞癥發(fā)病的獲得性因素主要包括：吸煙、惡性腫瘤、長(zhǎng)時(shí)間制動(dòng)、創(chuàng)傷及圍手術(shù)期、妊娠和產(chǎn)褥期、口服避孕藥及激素替代治療等。
　　國(guó)外對(duì)于靜脈血栓栓塞癥的遺傳性因素的研究已廣泛開展，F(xiàn)actor

4、 V Leiden突變和Prothrombin G20210A是白種人群中發(fā)現(xiàn)的與靜脈血栓栓塞癥關(guān)系密切的比較常見的兩種遺傳缺陷。Factor V Leiden突變?yōu)槌Ｈ旧w顯性遺傳病，是由于V因子編碼基因10號(hào)外顯子的1691位核苷酸腺嘌呤被鳥嘌呤置換，進(jìn)而翻譯的V因子蛋白氨基酸殘基506位精氨酸被谷氨酰胺取代，而506位精氨酸是活化蛋白C水解滅活V因子的靶點(diǎn)位置，突變體對(duì)活化蛋白C的水解作用不敏感，即V因子能夠抵抗活化蛋白C水解作用

5、，血液處于高凝狀態(tài)，血栓形成風(fēng)險(xiǎn)增加。Prothrombin G20210A是凝血酶原基因3'非翻譯區(qū)的20210位核苷酸腺嘌呤被鳥嘌呤置換，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物信使RNA的穩(wěn)定性增強(qiáng)，血漿凝血酶原水平升高，血栓形成風(fēng)險(xiǎn)增加。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道發(fā)現(xiàn)，遺傳性抗凝血酶、蛋白C、蛋白S缺乏癥在東西方人群的分布存在較大差異。本課題致力于研究抗凝血酶編碼基因變異與中國(guó)人群靜脈血栓栓塞癥的關(guān)聯(lián)，探尋中國(guó)人群靜脈血栓栓塞形成的分子遺傳學(xué)特點(diǎn)。
　　第

6、一部分抗凝血酶編碼基因變異與中國(guó)人群VTE的關(guān)聯(lián)研究
　　目的：
　　研究中國(guó)人群抗凝血酶缺乏癥的分子遺傳學(xué)特點(diǎn)，分析抗凝血酶編碼基因（SERPINC1）可能存在的變異與靜脈血栓栓塞癥的關(guān)聯(lián)。
　　方法：
　　選擇400例靜脈血栓栓塞癥患者血漿標(biāo)本進(jìn)行抗凝血酶缺乏癥篩查，發(fā)現(xiàn)抗凝血酶缺乏癥者16例，對(duì)其進(jìn)行抗凝血酶編碼基因重測(cè)序、血漿AT活性和抗原檢測(cè)及進(jìn)行凝血酶生成試驗(yàn)檢測(cè)；同時(shí)從抗凝血酶活性水平正常的靜脈血栓

7、栓塞癥患者中挑選190例進(jìn)行SERPINC1基因PCR重測(cè)序。
　　結(jié)果：
　　對(duì)400例靜脈栓塞癥患者血漿活性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)16例患者抗凝血酶血漿活性低于正常水平。通過(guò)對(duì)16例患者DNA樣本進(jìn)行SERPINC1基因PCR重測(cè)序發(fā)現(xiàn)有13種不同的基因改變。并意外的在190例AT活性水平正常的靜脈血栓栓塞癥患者DNA樣本中發(fā)現(xiàn)了8例突變，實(shí)驗(yàn)證明這8例突變均為血栓形成的危險(xiǎn)因素。
　　結(jié)論：
　　目前檢測(cè)方法對(duì)遺傳性抗

8、凝血酶缺乏癥的診斷敏感性不高；很多AT缺乏癥患者在常規(guī)的活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中不能被很好的被發(fā)現(xiàn)。推薦對(duì)不明原因的血栓栓塞癥患者進(jìn)行SERPINC1基因PCR重測(cè)序分析，即使AT活性處于正常水平。
　　第二部分抗凝血酶編碼基因熱點(diǎn)區(qū)域突變與靜脈血栓栓塞癥的關(guān)聯(lián)研究
　　目的：
　　研究中國(guó)人群 AT缺乏癥的分子遺傳學(xué)特點(diǎn)，探索抗凝血酶編碼基因可能存在的優(yōu)勢(shì)突變或多態(tài)性變異。
　　方法：
　　對(duì)收集的1335例靜脈血

9、栓栓塞癥患者及1315例正常對(duì)照進(jìn)行病例-對(duì)照研究，探尋SERPINC1基因可能存在的優(yōu)勢(shì)突變或多態(tài)性變異，并對(duì)其危害進(jìn)行功能驗(yàn)證。
　　結(jié)果：
　　發(fā)現(xiàn)了一個(gè)抗凝血酶熱點(diǎn)突變區(qū)域，在該區(qū)域存在四種不同的錯(cuò)義突變c.883G>A，c.881G>T，c.881G>A和c.880C>T；優(yōu)勢(shì)突變c.883G>A為靜脈血栓形成危險(xiǎn)因素，c.883G>A突變對(duì)血栓形成的OR值為10.917。
　　結(jié)論：
　　抗凝血酶編碼