人抗凝血酶Ⅲ分離純化工藝研究.pdf

1、人抗凝血酶Ⅲ(Human AntithrombinⅢ，ATⅢ)存在于人血中，是參與生理性凝血并控制凝血的重要因子，作為血液凝固系統(tǒng)的主要抑制劑，其所發(fā)揮的抗凝作用約占體內(nèi)總抗凝物質(zhì)作用的80％左右，是人體內(nèi)的主要抗凝血成分。
　　ATⅢ缺乏在臨床上會(huì)表現(xiàn)出各種臨床癥狀，其適用于體內(nèi)ATⅢ活性低于正常人水平70％以下的病人，全球范圍內(nèi)患有ATⅢ缺乏的人群約為正常人群的1/2000～1/5000。ATⅢ主要用于遺傳性抗凝血酶缺乏和獲得

2、性抗凝血酶缺乏。目前歐洲藥典、美國藥典，日本藥局方均已收載ATⅢ產(chǎn)品，而且全球主要的20個(gè)血液制品廠中已有四分之三的企業(yè)生產(chǎn)ATⅢ以供臨床需求。然而，國內(nèi)無產(chǎn)品上市。本研究以血漿為原料，旨在確定出ATⅢ的生產(chǎn)工藝，生產(chǎn)出符合臨床患者需求的產(chǎn)品，將會(huì)帶來巨大的社會(huì)效益與經(jīng)濟(jì)效益。
　　本課題的主要研究內(nèi)容和成果簡要介紹如下:
　　(1)分析公司目前血液制品生產(chǎn)工藝中各組分的ATⅢ分布情況，確定制備ATⅢ的原料。
　　通過

3、查閱文獻(xiàn)，對比國外該產(chǎn)品的工藝路線，綜合考慮公司現(xiàn)狀，通過對多批次去除冷沉淀后血漿、DEAE Sephadex-A50吸附后血漿進(jìn)行效價(jià)檢測，同時(shí)評估了原料的選擇對公司現(xiàn)有產(chǎn)品線的影響，最終選定A50吸附后血漿，采用親和層析捕獲目標(biāo)產(chǎn)品，可目的性獲得高回收率的ATⅢ產(chǎn)品。同時(shí)，不影響公司整個(gè)工藝主線上人凝血因子Ⅷ(Human coagulation factorⅧ)產(chǎn)品及下游產(chǎn)品人血白蛋白(Human Albumin，HA)、靜注人免疫

4、球蛋白(Intravenousimmunoglobulin，IVIG)等的生產(chǎn)，能夠充分利用現(xiàn)有資源，進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)血漿綜合利用率的提高，一方面為企業(yè)帶來經(jīng)濟(jì)效益同時(shí)也將產(chǎn)生一定的社會(huì)效益。
　　(2)經(jīng)分離純化研究和處方制劑工藝研究，最終確定了ATⅢ工藝路線，得到了高純度的ATⅢ產(chǎn)品。
　　本研究從制備ATⅢ的原料到制備出原液的分離純化研究，再經(jīng)處方制劑工藝研究，采用不同的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，確定原液生產(chǎn)各步驟的參數(shù)范圍及處方制劑工藝，

5、最終確定生產(chǎn)工藝路線為:血漿→離心去除冷沉淀→DEAE Sephadex-A50吸附→過濾→Capto Heparin親和層析→超濾→有機(jī)溶劑/去污劑法(S/D)滅活病毒→Capto Q離子交換層析→超濾→納米膜過濾→原液→配制→除菌過濾、分裝→凍干→出柜，軋蓋→干熱病毒滅活→外觀檢查→入庫。成品ATⅢ效價(jià)比活性高達(dá)6 IU/mg蛋白以上。
　　(3)確定ATⅢ生產(chǎn)工藝的最佳病毒滅活方法，并采用先進(jìn)的納米膜過濾去除病毒技術(shù)，驗(yàn)證其

6、病毒滅活效果。
　　為確保血液制品的安全性，生產(chǎn)工藝中通常采用多種不同機(jī)制的方法聯(lián)合應(yīng)用。本研究最終選取了S/D處理法與干熱法（凍干制品），分別用于脂包膜和非脂包膜病毒的滅活。另外采用先進(jìn)的納米膜過濾去除病毒技術(shù)，對細(xì)小病毒進(jìn)行了有效的去除，進(jìn)一步確保產(chǎn)品的安全性。病毒滅活/去除效果均委托中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所進(jìn)行預(yù)驗(yàn)證，病毒滅活/去除效果可達(dá)到國家相關(guān)要求。
　　(4)通過中試放大制備樣品，進(jìn)行質(zhì)量及穩(wěn)定性研究。