Wnt在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中作用及表達(dá)調(diào)控機制的研究.pdf

1、目的：宮頸癌是嚴(yán)重威脅婦女生命安全的頭號惡性腫瘤，發(fā)病率較高，且呈逐年上升和低齡化趨勢。宮頸癌發(fā)病是一個緩慢的過程，從正常宮頸組織發(fā)展為宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變，再到宮頸癌需要數(shù)十年時間，早期診斷、早期治療是改善宮頸癌治療效果、生活質(zhì)量及死亡率的主要策略，也是降低宮頸癌死亡率的關(guān)鍵所在。在癌細(xì)胞調(diào)控及調(diào)節(jié)中會涉及多個信號通路，如Hedgehog、Notch和Wnt等。Wnt是一類發(fā)育相關(guān)的保守信號通路，對于平衡組織發(fā)育后的各個系統(tǒng)均具有重要功

2、能。Wnt信號通路對于宮頸癌細(xì)胞的自我更新和分化的調(diào)控作用也會扮演重要角色。因此探究Wnt在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中表達(dá)作用，同時研究Wnt上下游信號通路的傳導(dǎo)變化，對于宮頸癌的發(fā)生發(fā)展甚至轉(zhuǎn)移都有非常重要的作用，明確Wnt在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制，將為宮頸癌臨床治療提供治療靶點及治療策略提供理論依據(jù)。
　　方法：采用免疫組化方法檢測不同宮頸組織中Wnt-3a及β-catenin蛋白表達(dá)，測定Wnt-3a陽性表達(dá)率和β-catenin

3、蛋白異常表達(dá)率，并分析其與宮頸癌臨床分期和病理分級的相關(guān)性；其次采用RT-PCR測定四種人宮頸癌細(xì)胞Hela、C33A、Siha、Caski細(xì)胞中Wnt-3和β-cateninmRNA表達(dá)情況，四種宮頸癌細(xì)胞中均可見Wnt-3和β-cateninmRNA表達(dá)，除C33A細(xì)胞中表達(dá)略低外，三種宮頸癌細(xì)胞Hela、Siha、Caski中Wnt-3和β-cateninWnt-3和β-catenin在宮頸癌細(xì)胞表達(dá)較高，這與人宮頸癌組織中免疫組

4、化檢查結(jié)果一致。為了分析Wnt變化以及下游級聯(lián)通路的變化，將不同宮頸組織放入液氮研磨，進行免疫印跡分析，分析不同宮頸組織中p-mTOR、p-STAT3和SOX2蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1）正常宮頸組織中幾乎不表達(dá)Wnt-3a，Wnt-3a陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿中，宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸鱗癌組織中可見細(xì)胞漿中表達(dá)的Wnt-3a蛋白黃色陽性表達(dá)，Wnt-3a陽性表達(dá)率不是很高。正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸鱗癌組織中的Wnt

5、-3a陽性表達(dá)率分別為10％（2/20）、35.0%（7/20）及50.0%（15/30）。正常宮頸組織中，β-catenin蛋白呈連續(xù)細(xì)胞膜表達(dá)，其表達(dá)為棕黃色，主要分布在棘層與上皮基底層細(xì)胞膜上，細(xì)胞漿無著色；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸鱗癌組織中，細(xì)胞膜上β-catenin蛋白表達(dá)呈現(xiàn)不同程度缺失，甚至不表達(dá)，β-catenin異常表達(dá)主要集中于細(xì)胞漿及細(xì)胞核中。正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變和宮頸鱗癌組織中的β-catenin異常

6、表達(dá)率分別為15.00%（3/20）、50.00%（10/20）及80.00%（24/30）。在30例宮頸癌標(biāo)本中，按FIGO標(biāo)準(zhǔn)分期，16例I期，8例II期，6例III期，Wnt-3a陽性表達(dá)率分別為43.75%（7/16）、50.00%（4/8）及66.67%（4/6），三組間比較和兩組間比較均不具顯著性差異，p>0.05；β-catenin異常表達(dá)率分別為68.75%（11/16）、87.50%（7/8）及100.00%（6/6）

7、，可見隨著臨床分期的升高，β-catenin陽性表達(dá)逐漸升高，但三組間比較和兩組間比較均不具顯著性差異，p>0.05。按病理分級11例G1級，14例G2級，5例G3級，Wnt-3a陽性表達(dá)率分別為45.45%（5/11）、42.86%（6/14）及80.00%（4/5），三組間比較和兩組間比較均不具顯著性差異，p>0.05；β-catenin陽性表達(dá)率分別為63.64%（7/11）、85.71%（12/14）及100.00%（5/5），

8、可見隨著宮頸癌病理分級的升高，β-catenin異常表達(dá)逐漸升高，但三組間比較和兩組間比較均不具顯著性差異，p>0.05。2）四種宮頸癌細(xì)胞中均可見Wnt-3和β-cateninmRNA表達(dá)，除C33A細(xì)胞中表達(dá)略低外，三種宮頸癌細(xì)胞Hela、Siha、Caski中Wnt-3和β-cateninmRNA表達(dá)均超過相對表達(dá)量1.0以上，提示W(wǎng)nt-3和β-catenin在宮頸癌細(xì)胞表達(dá)較高，這與人宮頸癌組織中免疫組化檢查結(jié)果一致。3）宮頸

9、鱗癌組織中p-mTOR、p-STAT3和SOX2蛋白表達(dá)顯著高于正常宮頸上皮組織和宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織，而宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織p-mTOR、p-STAT3和SOX2蛋白表達(dá)則顯著高于正常宮頸上皮組織。
　　結(jié)論：研究結(jié)果表明Wnt信號通路表達(dá)的激活及β-catenin的異常表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可以作為早期診斷宮頸癌的附加指標(biāo)，而且Wnt活化和β-catenin異常表達(dá)可能與mTOR-STAT3信號通路的變化相關(guān)，以