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文檔簡介
1、本研究以嗜酸乳桿菌 (Lactobacillus acidophilus,L.S) 1.1854為出發(fā)菌株,通過紫外誘變和化學誘變,獲得一株產(chǎn)共軛亞油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)較為穩(wěn)定的L.S1菌株,并對L.S1菌株特性進行了初步研究,同時對誘變菌株L.S1合成CLA條件進行了優(yōu)化研究,尤其是對L.S1菌株提高發(fā)酵乳中CLA條件進行了優(yōu)化研究,以期為我國功能性乳制品開發(fā)和生產(chǎn)提供試驗參數(shù)和理論依據(jù)參考
2、,具有一定的理論意義和實踐價值。 1.嗜酸乳桿菌生長曲線的研究,用紫外分光光度計每隔2h測定一次L.S菌株的吸光度值,繪制L.S菌株生長曲線。研究表明:前4h是延遲階段,4~16h為菌體的對數(shù)生長期,以后逐漸進入穩(wěn)定期。 2.采用平板計數(shù)法,對菌體細胞采用紫外誘變和化學誘變方法,研究菌體致死率。研究結(jié)果表明,用紫外線照射5s和硫酸二乙酯作用30min,菌體細胞致死率分別達到72%和75%。 3.對誘變菌株L.S1
3、特性進行了研究,試驗結(jié)果表明:菌體生長周期有所變化,對數(shù)生長期縮短,穩(wěn)定期延長;菌落變大,菌體變長變粗;菌體產(chǎn)酸性增強;L.S1菌株轉(zhuǎn)化LA為CLA穩(wěn)定性較好。 4.運用五因素二次旋轉(zhuǎn)正交組合設計建立了L.S1菌株產(chǎn)CLA發(fā)酵優(yōu)化條件的回歸模型為: Y=29.66-0.37X<,1>+2.5X<,2>-1.53X<,3>+1.07X<,5>-0.1X<,3>X<<5>-0.15X<,4>X<,5>-4.67X<,1><'
4、2>-3.62X<,2><'2>-2.94X<,3><'2>-1.67X<,4><'2>-2.94X<,5><'2>在MRS培養(yǎng)基上誘變菌株L.S1產(chǎn)CLA的最佳條件為:在培養(yǎng)溫度37℃,培養(yǎng)時間為24h,pH4.7,接種量6%,LA濃度0.1%條件下CLA產(chǎn)率達到31.2%。 5.在嗜酸乳桿菌轉(zhuǎn)化LA生成CLA條件優(yōu)化中,進一步研究了亞油酸誘導培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)、微氧環(huán)境以及吐溫-80乳化分散對產(chǎn)CLA量的影響,試驗結(jié)果表明:誘導
5、培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)、微氧環(huán)境和吐溫-80均能提高CLA產(chǎn)量。 6.采用單因素試驗,研究發(fā)酵過程“菌體濃度、底物濃度和產(chǎn)物濃度”等狀態(tài)變量隨發(fā)酵時間變化的規(guī)律及控制變量的關系。發(fā)酵過程中每隔3h取一次樣,進行生物量(菌體干重)、葡萄糖濃度、pH值和CLA生成量測定。結(jié)果表明:在菌體生長方面,0~3h菌體生長緩慢,是乳酸菌在發(fā)酵培養(yǎng)基中的適應階段,從3h起,菌體開始快速增長,進入對數(shù)生長期,15h后菌體生長緩慢進入穩(wěn)定期。在底物(葡萄糖
6、)消耗方面,從3h起,耗糖加快,18h以后耗糖減慢。在產(chǎn)物CLA生成方面,3h后緩慢生成產(chǎn)物,6h后產(chǎn)物生成加快,進入產(chǎn)物快速生長期,24h時產(chǎn)物生成最多,以后逐漸減少。 7.以經(jīng)誘變的L.S1 菌株發(fā)酵添加亞油酸的脫脂乳,試驗用三因素二次正交旋轉(zhuǎn)組合設計,對發(fā)酵脫脂乳生成CLA的條件進行了優(yōu)化試驗,結(jié)果表明:培養(yǎng)溫度37℃、pH值5.5、培養(yǎng)時間28h時為最佳優(yōu)化條件,此時CLA產(chǎn)率達33.4%。得到最佳回歸模型為:
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