甜瓜細菌性葉枯病膠體金免疫試紙條的研發(fā)與應用.pdf

1、甜瓜細菌性葉枯病由丁香假單胞菌黃瓜致病變種（Pseudomonas syringae pv.lachrymans）引起，在世界范圍內均會發(fā)生，造成不同程度的損失，近年來在中國逐漸發(fā)展嚴重，對果實產量帶來嚴重損失。
　　瓜類細菌性果斑病(bacterial fruit blotch)的病原菌被確認為西瓜噬酸菌（Acidovorax citrulli），是一種危害西瓜和甜瓜的世界檢疫性種傳病害。丁香假單胞菌和西瓜噬酸菌（Acidovo

2、rax citrulli）在西瓜和甜瓜上有著很相似的發(fā)病癥狀，我們用肉眼和傳統(tǒng)的檢驗檢疫方法是很難將兩者區(qū)分開的。所以建立高效，快捷，操作簡單的檢測技術區(qū)分這兩種病害是防止甜瓜細菌性葉枯病病原菌傳播的有效手段。
　　本研究采用腹腔免疫方式免疫小鼠，通過細胞融合技術獲得雜交瘤細胞株，成功制備單克隆抗體。采用雙抗體夾心模式，使用兩個不同特異性的單克隆抗體，制備免疫層析試紙條。一種抗甜瓜細菌性葉枯病菌的單抗(b)被固定在硝酸纖維素膜檢測

3、區(qū)域，而另一種抗甜瓜細菌性葉枯病菌單抗(c)偶聯到作為顯色劑的膠體金粒子上。然后將植物樣品溶液通過毛細管作用，與抗甜瓜細菌性葉枯病菌的抗體在檢測區(qū)發(fā)生反應，使甜瓜細菌性葉枯病菌滯留在檢測區(qū)域，從而出現紅色結果。在定性檢測中，本試紙條對甜瓜細菌性葉枯病菌的定性檢測限為2.5×103cfu/mL，與細菌性果斑病菌不存在交叉反應，具有很強的特異性。在半定量檢測中，甜瓜細菌性葉枯病菌在2.5×103cfu/mL～105cfu/mL濃度范圍內，T