川芎嗪對高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細(xì)的影響.pdf

1、[目的]： 1.探討川芎嗪(TMP)對高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細(xì)胞(MCs)增殖及其細(xì)胞外基質(zhì)(ECH)含量的影響。 2.觀察TMP對高糖環(huán)境下大鼠MCs產(chǎn)生的ROS含量的影響。 3.觀察TMP對高糖培養(yǎng)下大鼠MCs的基質(zhì)金屬蛋白酶mRNA表達(dá)及其活性的影響。 進(jìn)一步探討TMP對糖尿病腎病(DN)的保護(hù)作用及其可能作用機(jī)制，為TMP臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 [方法]： 體外培養(yǎng)大鼠腎小球系膜

2、細(xì)胞株，分對照組：葡萄糖濃度5.5mM、高糖組：葡萄糖濃度25mM、TMP低劑量組(高糖培養(yǎng)液+200μg/mlTMP)、TMP中劑量組(高糖培養(yǎng)液+500μg/mlTMP)、TMP高劑量組(高糖培養(yǎng)液+1000μg/mlTMP)。分別培養(yǎng)12h、24h、48h。 1.CASY細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)細(xì)胞存活率； 2.CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活力： 3.酶聯(lián)免疫(ELISA)法檢測細(xì)胞上清液細(xì)胞外基質(zhì)ColⅣ及FN的含量。

3、 4.比色法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量的變化。 5.明膠酶譜法檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的活性。RT-PCR法檢測MMP-2及金屬蛋白酶抑制劑-2(TIMP-2)的mRNA表達(dá)。 [結(jié)果]： 1.各實(shí)驗(yàn)組之間細(xì)胞存活率無統(tǒng)計學(xué)差異； 2.與對照組比較，高糖組MCs增殖顯著增快，細(xì)胞上清中Col

4、Ⅳ、FN含量顯著增多：與高糖組比較，TMP能干預(yù)MCs過度增殖，能抑制ColⅣ、FN分泌。 3.與對照組比較，高糖組MCs上清液SOD、GSH含量F降，MDA含量增加：與高糖組比較，TMP能使MCs上清SOD、GSH含量增加，MDA含量減少。 4.與對照組比較，高糖能抑制基質(zhì)降解酶MMP-2、MMP-9活性及降低MMP-2、增加TIMP-2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)，與高糖組比較，TMP干預(yù)能增加MMP-2、MMP-9的活性

5、及增加MMP-2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)，減少TIMP-2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)，提高了MMP-2/TIMP-2比值。 [結(jié)論]： 1.體外高糖能明顯促進(jìn)MCs的異常增殖和誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，降低的MMP-2、MMF-9的活性及其MMP-2mRNA轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)，增加TIMP-2mRNA的轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)，使細(xì)胞外基質(zhì)ColⅣ、FN含量增多、降解減少。因此高糖刺激能明顯促進(jìn)DN的進(jìn)展。 2.川芎嗪能抑制MCs的異常增殖及氧化應(yīng)