TIP30低表達(dá)與膀胱癌患者臨床預(yù)后相關(guān)性、促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　膀胱腫瘤(bladdercancer，BC)是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，74％的膀胱腫瘤初診時(shí)都是淺表性膀胱腫瘤[1]。目前對(duì)于淺表性膀胱癌的治療主要包括手術(shù)加術(shù)后膀胱內(nèi)化療，但是大部分患者仍然出現(xiàn)復(fù)發(fā)及進(jìn)展，直至進(jìn)入腫瘤晚期，而對(duì)于晚期膀胱愛(ài)，目前缺乏有效的治療手段。因此尋找新的有用的膀胱腫瘤治療手段以提高治療效果具有非常重要的臨床意義。
　　TIP30基因是一種抑癌基因[2]。文獻(xiàn)證實(shí)TIP30在

2、多種惡性腫瘤中表達(dá)水平下降，如肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌和肝細(xì)胞癌等[2-12]。上調(diào)TIP30可以抑制多種腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤血管形成及轉(zhuǎn)移[3,4,13，14]。
　　目前國(guó)內(nèi)有研究發(fā)現(xiàn)TIP30蛋白在膀胱腫瘤中低表達(dá)，但具體機(jī)制未有研究，且國(guó)內(nèi)外均無(wú)相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道。因此探索TIP30在膀胱腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制，有望為膀胱腫瘤的基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.用免疫組化檢測(cè)TIP3

3、0在膀胱腫瘤和正常膀胱黏膜中的表達(dá)，分析TIP30表達(dá)強(qiáng)度與患者多項(xiàng)臨床病理參數(shù)的關(guān)系，分析TIP30的表達(dá)和無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期的關(guān)系。
　　2.構(gòu)建載體過(guò)表達(dá)T24細(xì)胞中TIP30基因，檢測(cè)過(guò)表達(dá)后腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)能力、細(xì)胞周期及膀胱腫瘤細(xì)胞遷移能力和侵襲能力。
　　3.運(yùn)用WB檢測(cè)過(guò)表達(dá)TIP30后EGFR/AKT信號(hào)傳導(dǎo)通路相關(guān)蛋白表達(dá)。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:
　　采用SPSS17.0行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同組間TI

4、P30表達(dá)MOD值比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)和單因素方差分析(One-Way ANOVA)，多個(gè)樣本均數(shù)兩兩比較采用Dunnett T3法。生存分析采用Kaplan-Meier法，差異性檢驗(yàn)采用log-rank法。采用多因素Cox回歸模型對(duì)影響患者預(yù)后的相關(guān)因素進(jìn)行分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn)，和正常組織相比，TIP30在膀胱腫瘤組織中的表達(dá)明顯下降。低

5、級(jí)別(G1)組膀胱腫瘤組織中TIP30表達(dá)較高級(jí)別(G2+G3)組明顯下降。非肌層浸潤(rùn)組TIP30的表達(dá)明顯高于肌層浸潤(rùn)組。
　　2.進(jìn)展組患者TIP30的表達(dá)明顯低于非進(jìn)展組。TIP30高表達(dá)組的總生存時(shí)間明顯高于低表達(dá)組，但兩組患者的無(wú)瘤生存時(shí)間無(wú)明顯差異。
　　3.TIP30過(guò)表達(dá)后T24細(xì)胞中TIP30mRNA及TIP30蛋白表達(dá)均明顯上升，進(jìn)而抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞周期G1期阻滯、誘導(dǎo)凋亡。Transwell侵襲及

6、遷移能力檢測(cè)提示過(guò)表達(dá)TIP30基因能夠抑制T24細(xì)胞的侵襲和遷移能力。
　　4.TIP30過(guò)表達(dá)后抑制EGFR/AKT的表達(dá)，促進(jìn)Bax和P21表達(dá)上調(diào)及抑制Bcl2，cyclinD1和cyclinE的表達(dá)抑制T24細(xì)胞增殖周期，通過(guò)激活caspase3引起T24細(xì)胞凋亡。通過(guò)下調(diào)MMP2，6，9表達(dá)抑制T24細(xì)胞轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論:
　　TIP30可能參與了膀胱腫瘤發(fā)生、發(fā)展。TIP30作為抑癌基因，可作為膀胱腫瘤治