雙特異性磷酸酶1(Dusp1)在膽囊癌生長(zhǎng)、侵襲轉(zhuǎn)移及血管形成中的作用.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 Dusp1在膽囊癌及膽囊正常組織中的表達(dá)
　　目的:
　　觀(guān)察雙特異性磷酸酶1(Dusp1)在膽囊癌組織及正常膽囊組織中的表達(dá)量，初步探討Dusp1在膽囊癌發(fā)生中的作用。
　　方法:
　　Dusp1免疫組織化學(xué)染色，檢測(cè)47例臨床膽囊癌及25例正常膽囊組織標(biāo)本，研究Dusp1在膽囊癌組織及正常膽囊組織中的表達(dá)情況，比較在癌組織和正常組織中;高度惡性膽囊癌與低度

2、惡性膽囊癌組織中Dusp1的含量差異。
　　結(jié)果:
　　Dusp1在膽囊癌組織主要表達(dá)量強(qiáng)弱不一，以陰性和弱陽(yáng)性表達(dá)居多(51.1％)，中等陽(yáng)性表達(dá)次之(31.9％);少部分為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(18％);在正常膽囊組織中主要是中等陽(yáng)性(40％)和強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)為主(32％);部分呈弱陽(yáng)性表達(dá)(28％)。總體上膽囊癌組織中Dusp1表達(dá)量低于正常組織中，Dusp1在高度惡性膽囊癌組患者的腫瘤組織中表達(dá)量低于低度惡性組的腫瘤組織。

3、　　結(jié)論:
　　與正常膽囊組織相比，Dusp1在膽囊癌組織中呈下調(diào)性表達(dá);隨著腫瘤侵襲性增強(qiáng)，Dusp1表達(dá)量降低，初步提示Dusp1在膽囊癌中可能起抑制腫瘤進(jìn)展的作用。
　　第二部分 Dusp1對(duì)膽囊癌增殖和克隆形成能力的影響
　　目的:
　　研究Dusp1對(duì)膽囊癌增殖和克隆形成能力的影響。
　　方法:
　　運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng)，在膽囊癌細(xì)胞系GBC-SD和SGC996中構(gòu)建Dusp1敲減及過(guò)表達(dá)細(xì)胞

4、系。通過(guò)MTS細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和克隆形成實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)在膽囊癌細(xì)胞中Dusp1敲減以及Dusp1過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖和克隆形成能力的影響。同時(shí)，構(gòu)建裸鼠皮下成瘤模型，在動(dòng)物體內(nèi)研究SGC996細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Dusp1時(shí)對(duì)腫瘤增殖能力的影響。
　　結(jié)果:
　　運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng)，在Dusp1含量相對(duì)較高的GBC-SD細(xì)胞中構(gòu)建了Dusp1敲減細(xì)胞系，在GBC-SD和SGC996中構(gòu)建Dusp1過(guò)表達(dá)細(xì)胞系，并通過(guò)Real-timePCR和W

5、estern Blot方法進(jìn)行驗(yàn)證病毒感染效率。在GBC-SD細(xì)胞中敲減Dusp1，細(xì)胞增殖和克隆形成能力增強(qiáng)。在SGC996和GBC-SD細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Dusp1，細(xì)胞增殖和克隆形成能力均減弱。進(jìn)一步的機(jī)制研究顯示Dusp1敲減細(xì)胞中pERK含量升高，Dusp1過(guò)表達(dá)細(xì)胞中pERK含量降低，Dusp1可能通過(guò)降低pERK表達(dá)量抑制細(xì)胞增殖;在裸鼠皮下成瘤模型中，將Dusp1過(guò)表達(dá)的SGC996細(xì)胞與其對(duì)照組細(xì)胞各接種到6只裸鼠皮下，約1

6、0天后實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組裸鼠均成瘤，觀(guān)察20天后，Dusp1過(guò)表達(dá)時(shí)裸鼠皮下腫瘤的體積與重量小于對(duì)照組腫瘤，腫瘤免疫組化結(jié)果提示Dusp1過(guò)表達(dá)腫瘤組織中pERK表達(dá)量降低。
　　結(jié)論:
　　Dusp1能抑制膽囊癌增殖和克隆形成能力，這一功能可能通過(guò)負(fù)向調(diào)控pERK表達(dá)量實(shí)現(xiàn)。
　　第三部分 Dusp1對(duì)膽囊癌侵襲轉(zhuǎn)移和血管形成能力的影響
　　目的:
　　研究Dusp1對(duì)膽囊癌侵襲轉(zhuǎn)移和血管形成能力的影響。

7、r>　　方法:
　　運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng)，在膽囊癌細(xì)胞系GBC-SD和SGC996中構(gòu)建Dusp1敲減及過(guò)表達(dá)細(xì)胞系。通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，transwell遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)，分別檢測(cè)Dusp1敲減或過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞遷移/侵襲能力的影響。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)通過(guò)上述兩組細(xì)胞分別接種到10只裸鼠皮下，在動(dòng)物體內(nèi)研究Dusp1對(duì)膽囊癌侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響，進(jìn)一步觀(guān)察了腫瘤血管形成情況。
　　結(jié)果:
　　運(yùn)用慢病毒載體系統(tǒng)，在膽囊癌細(xì)胞系GBC-SD

8、和SGC996中構(gòu)建Dusp1敲減及過(guò)表達(dá)細(xì)胞系。并通過(guò)Real-time PCR和Western Blot方法驗(yàn)證病毒感染效率。細(xì)胞劃痕，遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)顯示，在GBC-SD細(xì)胞中敲減Dusp1，促進(jìn)了GBC-SD的遷移和侵襲。在SGC996和GBC-SD細(xì)胞中過(guò)表達(dá)Dusp1，抑制了細(xì)胞的遷移和侵襲。進(jìn)一步的研究提示Dusp1可能通過(guò)Dusp1-pERK-MMP2抑制膽囊癌細(xì)胞的侵襲能力。在裸鼠皮下轉(zhuǎn)移瘤模型中，將Dusp1過(guò)表達(dá)的S

9、GC996細(xì)胞與其對(duì)照組細(xì)胞分別接種到10只裸鼠皮下，一個(gè)月后解剖觀(guān)察腫瘤轉(zhuǎn)移情況。在Dusp1過(guò)表達(dá)組中有一只裸鼠發(fā)生轉(zhuǎn)移，對(duì)照組3只裸鼠發(fā)生轉(zhuǎn)移;Dusp1在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中也抑制了膽囊癌的轉(zhuǎn)移。觀(guān)察裸鼠皮下腫瘤的血管形成情況及CD31免疫組化染色結(jié)果提示Dusp1抑制腫瘤血管形成，進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)Dusp1可能通過(guò)Dusp1-pERK-VEGFA通路抑制膽囊癌的腫瘤血管形成。
　　結(jié)論:
　　Dusp1抑制了膽囊癌的侵襲轉(zhuǎn)