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文檔簡(jiǎn)介
1、背景及目的:支氣管哮喘是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病,既往認(rèn)為哮喘是以嗜酸粒細(xì)胞(EOS)炎癥為特征的變應(yīng)性疾病。但近年來(lái),越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)有一部分是以中性粒細(xì)胞為主,尤其是重癥哮喘、難治性哮喘患者,但對(duì)于支氣管哮喘患者氣道內(nèi)中性粒細(xì)胞增多的機(jī)制至今并未闡明。本實(shí)驗(yàn)在前期細(xì)胞及動(dòng)物研究的基礎(chǔ)上主要從臨床水平去闡述KLF2與L-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18對(duì)支氣管哮喘患者中性
2、粒細(xì)胞粘附遷移的影響。
方法:隨機(jī)收集哮喘患者29例,并按照病情程度分為輕度哮喘組(L組)13例、中度哮喘組(M組)11例、重度哮喘組(S組)5例,并收集與哮喘患者性別及年齡相匹配的健康對(duì)照組(C組)12例,進(jìn)行白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù),利用梯度離心法分離中性粒細(xì)胞并利用迪夫染色鑒定中性粒細(xì)胞,Real-time PCR檢測(cè)KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18mRNA表達(dá),Wester
3、n-blot檢測(cè)KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2蛋白表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)L-selectin、CD11a、CD11b、CD18平均熒光強(qiáng)度,ELISA檢測(cè)血清中IL-8濃度,Transwell小室檢測(cè)中性粒細(xì)胞的遷移能力,粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)中性粒細(xì)胞的粘附能力。
結(jié)果:
1.外周血白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)
C組、L組、M組、S組中性粒細(xì)胞百分比(61.35(51.90~65.70)、62.54(54.
4、75~66.12)、70.20(65.34~75.50)、89.84(73.35~94.57))依次呈上升趨勢(shì),且M組與C組、L組比較、S組與C組、L組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。輕度哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞百分比較其他三組高,并且S組與C組、L組比較、M組與L組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
2.中性粒細(xì)胞的分離及鑒定
從外周血中分離出中性粒細(xì)胞,通過(guò)迪夫染色鑒定中性粒細(xì)胞,且分離出的中性粒細(xì)胞純度
5、在95%以上。
3.各組研究對(duì)象外周血中性粒細(xì)胞KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18mRNA表達(dá)變化
Real-time PCR結(jié)果顯示:C組、L組、M組、S組KLF2mRNA相對(duì)表達(dá)量(1.03(0.88~1.95)、0.82(0.55~1.31)、0.70(0.37~0.98)、0.65(0.44~0.81))依次呈下降趨勢(shì),而L-selectin mRNA的相
6、對(duì)表達(dá)量(1.01(0.92~1.14)、1.48(1.07~2.07)、2.93(2.62~3.51)、6.41(5.35~6.96))依次呈增加趨勢(shì),CXCR1、CXCR2、CD11a、CD11b、CD18 mRNA的表達(dá)均呈逐漸增加趨勢(shì),且以上因子M、S組與C組比較、L組與S組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
4.各組研究對(duì)象外周血中性粒細(xì)胞KLF2、L-selectin、CXCR1、CXCR2蛋白表達(dá)變化
7、> Western blot結(jié)果顯示:C組、L組、M組、S組KLF2蛋白相對(duì)表達(dá)量(0.52(0.39~0.61)、0.45(0.39~0.55)、0.37(0.31~0.43)、0.26(0.25~0.30))依次呈下降趨勢(shì),且M、S組與C組比較、L組與S組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而L-selectin蛋白的表達(dá)量(0.26(0.22~0.28)、0.35(0.29~0.44)、0.38(0.31~0.46)、0.3
8、9(0.36~0.42))依次呈增加趨勢(shì),且L、M、S組與C組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CXCR1、CXCR2蛋白的表達(dá)量均呈逐漸增加趨勢(shì),且M、S組與C組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
5.各組研究對(duì)象外周血中性粒細(xì)胞L-selectin、CD11a、CD11b、CD18的平均熒光強(qiáng)度
流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:L-selectin、CD11a、CD11b、CD18的平均熒光強(qiáng)度在C組、L組、M組
9、、S組中依次呈增加趨勢(shì),且M、S組與C組比較、L組與S組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
6.各組研究對(duì)象外周血血清中IL-8表達(dá)情況
ELISA結(jié)果顯示:C組、L組、M組、S組血清中IL-8的表達(dá)量依次呈增加趨勢(shì),且M、S組與C組比較、S組與L組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
7.各組研究對(duì)象外周血中性粒細(xì)胞的遷移情況
根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取濃度為100ng/ml的IL-8進(jìn)行Tr
10、answell實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示:各組研究對(duì)象外周血中性粒細(xì)胞遷移率:S組>M組>L組>C組,且L、M、S組與C組比較、L組與S組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
8.各組研究對(duì)象外周血中性粒細(xì)胞的粘附情況
各組研究對(duì)象外周血中性粒細(xì)胞粘附能力結(jié)果顯示:S組>M組>L組>C組,且M、S組與C組比較、L組與S組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
9.各組血中性粒細(xì)胞KLF2與L-selectin、C
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