轉(zhuǎn)高賴氨酸蛋白基因玉米食用安全性評價及致敏評價模式研究.pdf

1、隨著我國轉(zhuǎn)基因食品的開發(fā)和國外轉(zhuǎn)基因食品的進(jìn)入，消費(fèi)者使用轉(zhuǎn)基因食品的機(jī)會在不斷的增加。由于轉(zhuǎn)基因食品可能對環(huán)境和健康造成的影響的不確定性，其安全性一直是備受世人關(guān)注的焦點(diǎn)。 本論文對轉(zhuǎn)賴氨酸蛋白玉米的食用安全性及致敏安全評價模型的建立進(jìn)行了研究。營養(yǎng)學(xué)評價是安全評價的重要組成部分，本文通過對轉(zhuǎn)高賴氨酸蛋白玉米的營養(yǎng)成分、氨基酸組成、蛋白組分等分析，全面分析了其營養(yǎng)價值及其非期望效應(yīng)，為轉(zhuǎn)基因食品尤其對于第二代轉(zhuǎn)基因食品的營養(yǎng)評

2、價提供了依據(jù)。 為了更好地分析外源蛋白的食用安全性及致敏性，利用pET-30a表達(dá)載體，在E.coliBL21中高效表達(dá)外源高賴氨酸蛋白，利用Ni-NTA親和層析柱純化蛋白。通過試驗，找到了表達(dá)蛋白的最佳表達(dá)時間為3～4h，誘導(dǎo)劑IFTG濃度為0.6mmol/L及蛋白純化最佳條件，表達(dá)蛋白的量與純度滿足今后的安全研究需要。 對大腸桿菌表達(dá)的純化高賴氨酸蛋白開展了一系列的食用安全性研究，包括：利用生物信息學(xué)工具對高賴氨酸蛋

3、白進(jìn)行結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)預(yù)測，利用ExPASy網(wǎng)站提供的多個軟件對高賴氨酸蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)預(yù)測，并利用BLAST和FASTA程序多個數(shù)據(jù)庫進(jìn)行搜索比對，確定高賴氨酸蛋白與數(shù)據(jù)庫中已知的致敏蛋白不具有同源性。 進(jìn)行了外源蛋白的模擬胃腸液消化穩(wěn)定性研究，包括胃蛋白酶穩(wěn)定性試驗和胰蛋白酶穩(wěn)定性試驗，并經(jīng)western-blot實驗驗證，高賴氨酸蛋白在體外模擬胃腸液中不具有消化穩(wěn)定性能。外源蛋白的食用安全性和致敏動物模型的建立。本研究

4、將BALB/c小鼠和BN大鼠模型相結(jié)合，將口服和腹腔注射相結(jié)合，利用純化外源蛋白對BALB/c小鼠腹腔注射，對BN大鼠口服處理，綜合判斷其毒性、免疫特性和致敏性。結(jié)果表明，高賴氨酸蛋白對BALB/c小鼠和BN大鼠均不具有致敏性。 通過亞慢性毒性試驗評價了轉(zhuǎn)高賴氨酸玉米飼喂大鼠的安全性。分別飼喂含30％添加量的玉米和最大添加量的玉米，試驗期13wks。建立了以生長性能、血液學(xué)、血清化學(xué)、尿液指標(biāo)、解剖學(xué)、組織病理等綜合指標(biāo)判斷轉(zhuǎn)基

5、因食品安全性的亞慢性全食物飼喂動物試驗?zāi)Ｐ汀?建立了評價轉(zhuǎn)基因植物外源基因水平轉(zhuǎn)移的大鼠評價模型和大鼠的咬肌組織、腸組織、糞便及腸道微生物的基因組的提取方法及PCR檢測體系。大鼠的亞慢性毒性試驗顯示，轉(zhuǎn)基因玉米以比正常水平高2倍添加在日糧中，無論對動物健康還是對動物產(chǎn)品都具有生物學(xué)安全性，外源基因沒有發(fā)生水平轉(zhuǎn)移。 本文通過對轉(zhuǎn)基因玉米的營養(yǎng)評價、外源蛋白性質(zhì)結(jié)構(gòu)及與己知致敏源的同源性分析、穩(wěn)定性檢測、食用安全性、致敏性