心磷脂酰基轉移酶1在糖尿病模型大鼠坐骨神經(jīng)中的表達及影響.pdf

1、背景與目的：在糖尿病并發(fā)癥發(fā)生的諸多機制中，氧化應激是關鍵，而活性氧簇主要產(chǎn)生于線粒體，故線粒體結構與功能的正常與否影響著氧化應激水平。心磷脂（Cardiolipin,CL）幾乎是線粒體獨有的，位于線粒體內(nèi)膜的一種磷脂成分，參與維持線粒體正常的形態(tài)與功能。CL在線粒體呼吸鏈電子傳遞，線粒體融合與分裂，細胞凋亡和線粒體自噬等方面起著重要作用。CL合成以后需要經(jīng)歷重構即?；鶄孺湹闹嘏挪拍馨l(fā)揮上述功能。與CL重構相關的酶有Taffazin（T

2、AZ），Monolysocardiolipin Acyltransferase1（MLCLAT1）和心磷脂?；D移酶1（Acyl-CoA:lysocardiolipin Acyltransferase1,ALCAT1）。ALCAT1是心磷脂重構的關鍵酶，但ALCAT1過表達可能會引起功能性心磷脂缺失及心磷脂側鏈的改變，從而引起線粒體功能障礙，加劇氧化應激，導致一些疾病的發(fā)生。
　　本研究通過檢測不同病程階段的糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)組織

3、中ALCAT1 mRNA和蛋白的表達水平及各階段坐骨神經(jīng)超微結構的病理變化，來初步探討ALCAT1的表達與糖尿病周圍神經(jīng)病變的相關性，并通過抗氧化干預來觀察氧化應激水平對ALCAT1表達的影響。
　　方法：
　?。?）分組與模型建立：雄性大鼠60只，隨機等分為正常對照組(NC)，糖尿病4周組(D4)，糖尿病8周組(D8)，抗氧化組(AO)。除NC組外，其余3組均通過腹腔注射鏈脲佐菌素處理成糖尿病模型。
　?。?）神經(jīng)電

4、生理設備檢測大鼠坐骨神經(jīng)傳導速度(sciatic nerve conduction velocity,sNCV)。
　　（3）熒光定量PCR和Western Blot分別檢測坐骨神經(jīng)ALCAT1 mRNA和蛋白表達量。
　?。?）氧化應激標志物檢測：分別檢測各組大鼠血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)及谷胱甘肽(glutathione,GSH

5、)。
　?。?）電鏡觀察各組大鼠坐骨神經(jīng)超微結構的變化。
　　結果：
　　1.神經(jīng)傳導速度：NC、D4、D8、AO各組sNCV依次為（56.56±4.40）vs（53.43±4.25）vs（41.90±3.79）vs（53.38±3.26）m/s。
　　2.ALCAT1表達：NC、D4、D8、AO組ALCAT1 mRNA表達量依次為（（0.92±0.08）*10-2）vs（（1.38±0.12）*10-2）vs（

6、（2.57±0.24）*10-2）vs（（1.34±0.09）*10-2）；NC、D4、D8、AO四組ALCAT1蛋白相對表達量為（0.56±0.04）vs（1.10±0.09） vs（1.56±0.13）vs（1.02±0.08）。
　　3.血清氧化應激水平：NC、D4、D8、AO組SOD(U/ml)水平依次為（56.72±3.75）vs（33.93±3.87）vs（25.50±2.33）vs（35.89±4.25）；MDA(n

7、mol/ml)水平依次為（1.58±0.23）vs（3.84±0.41）vs（4.94±0.78）vs（3.48±0.37）；GSH(mgGSH/l)水平依次為（17.63±1.42）vs（9.69±1.52）vs（5.80±1.69）vs（11.19±1.34）。
　　4.坐骨神經(jīng)電鏡圖：NC組線粒體、髓鞘結構完整；D4組線粒體輕度水腫，正常結構仍可見，髓鞘出現(xiàn)變形；D8組線粒體嵴斷裂，髓鞘板層散亂，有囊性間隙出現(xiàn)；AO組線粒體