木丹顆粒對(duì)糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)病變干預(yù)治療的研究.pdf

1、背景與目的：
　　DPN的發(fā)病因素復(fù)雜多樣，是多種因素作用的共同結(jié)果，主要有氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、血管及代謝因素等，線粒體作為三大能量代謝的關(guān)鍵和活性氧的主要來源，是氧化損傷及細(xì)胞凋亡的靶器官，在胰島素分泌等過程中發(fā)揮重要作用，參與了糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生，為DPN重要的發(fā)病機(jī)制[1]。作為細(xì)胞內(nèi)基本事件之一的線粒體的融合和分裂是同時(shí)發(fā)生的并不斷地進(jìn)行，二者保持一定動(dòng)態(tài)平衡，這類平衡對(duì)維持正常的線粒體形態(tài)和功能十分必要，打破此平衡會(huì)

2、導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生功能異常。當(dāng) Drp-1(線粒體分裂相關(guān)蛋白)超表達(dá)時(shí),線粒體分裂高于融合，使線粒體分裂過度，打破了這一動(dòng)態(tài)平衡,導(dǎo)致線粒體結(jié)構(gòu)及功能發(fā)生改變,激活相關(guān)凋亡因子,從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。已有研究證實(shí)Drp-1影響線粒體形態(tài)、功能，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，與糖尿病、心血管疾病、腫瘤及神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病等的發(fā)病密切相關(guān)[2]。本實(shí)驗(yàn)觀察木丹顆粒及木丹顆粒聯(lián)合α-硫辛酸對(duì)Drp-1、Bax、Bcl-2的影響，探討木丹顆粒及木丹顆粒聯(lián)合α-硫辛酸治療

3、DPN的有效性及其機(jī)制。
　　方法：
　　1.分組及建模：SPF級(jí)健康雄性大鼠50只，8周齡，隨機(jī)分為五組，每組各10只，分別為正常對(duì)照（NC）組，糖尿病(DM)組、木丹顆粒(MD)組和α-硫辛酸(LA)組,木丹顆粒聯(lián)合α-硫辛酸（CT）組；除NC組外，其余4組均一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozotocin,STZ）60mg/kg，造成糖尿病模型。
　　2.造模成功后分別給予不同藥物灌胃處理，觀察大鼠一般情況

4、包括精神狀態(tài)、毛色、攝食飲水量、墊料干濕度及日常活動(dòng)情況等，并于每四周測(cè)量體重及血糖。
　　3.使用神經(jīng)電生理儀器檢測(cè)大鼠的坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度(sciatic nerve conduction velocity, sNCV)。
　　4.使用分光光度法分別檢測(cè)各組大鼠血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)及谷胱甘肽(glutathione, G

5、SH),過氧化氫酶（catalase，CAT）水平。
　　5.坐骨神經(jīng)電鏡觀察：按照電鏡檢查常規(guī)制片；用透射電鏡觀察各組大鼠坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)并攝片。
　　6.檢測(cè)坐骨神經(jīng)Drp-1、Bax、Bcl-2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量使用熒光定量PCR。
　　結(jié)果：
　　1.實(shí)驗(yàn)期間觀察到，與NC組大鼠比，DM組大鼠精神萎靡、多飲、多食、多尿、蜷臥拱背、毛發(fā)稀疏發(fā)黃、皮膚潰爛、不喜活動(dòng)、墊料濕，體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢甚至降低，眼球呈

6、白內(nèi)障改變；治療組大鼠也出現(xiàn)上述癥狀，但較 DM組為輕。實(shí)驗(yàn)過程中死亡大鼠4只,其中DM組死亡2只,MD組死亡1只，LA組1只。
　　2.各組血糖值：NC、DM、MD、LA和CT組造模前血糖值分別為6.07±0.45、6.09±0.38、6.10±0.49、6.22±0.39、6.22±0.40 mmol/L，治療四周后血糖值分別為6.12±0.16、27.10±1.13、28.27±1.44、26.37±1.33、25.32±1

7、.25 mmol/L，治療八周后血糖值為5.87±0.26、27.16±3.30、28.23±3.62、26.43±3.21、25.50±3.03，治療十二周后血糖值為6.17±0.29、27.41±3.07、28.58±3.29、26.70±3.24、25.73±3.00。
　　3.神經(jīng)傳導(dǎo)速度：NC、DM、MD、LA和CT組sNCV分別為55.76±0.60、43.39±1.35、49.11±0.55、49.07±0.51、5

8、2.38±0.75 m/s。
　　4.大鼠血清氧化應(yīng)激水平：NC、DM、MD、LA和CT組T-SOD(U/ml)水平依次為248.04±22.13、99.84±5.81、160.89±11.63、154.09±15.79、175.79±8.64， MDA(nmol/ml)水平依次為；4.17±0.28、8.66±0.78、6.26±0.17、6.10±0.20、5.21±0.36、CAT(nmol/ml)水平依次為14.99±1.

9、08、7.97±0.91、9.70±0.44、9.86±0.34、11.83±0.51， GSH(mg/L)水平依次為19.73±1.41、7.50±0.65、11.99±0.81、11.57±0.89、14.82±1.22。
　　5.大鼠坐骨神經(jīng)電鏡顯示：NC組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)纖維的髓鞘致密完整,線粒體排列均勻，Schwann細(xì)胞正常；DM組大鼠坐骨神經(jīng)神經(jīng)纖維的髓鞘板層分離,有的出現(xiàn)脫髓鞘,線粒體腫脹變形，線粒體嵴消失,Sch

10、wann細(xì)胞變性壞死；LA組大鼠坐骨神經(jīng)髓鞘出現(xiàn)斑狀變化,髓鞘變化較模型組稍輕；MD組大鼠坐骨神經(jīng)表現(xiàn)為髓鞘變化不明顯,髓鞘變化較糖尿病組輕，偶見典型的節(jié)段性和斑塊狀脫髓鞘；CT組大鼠坐骨神經(jīng)表現(xiàn)為有髓纖維豐富飽滿,髓鞘偶見疏松,Schwann細(xì)胞輕度水腫,線粒體形態(tài)大部分正常。
　　6.NC、DM、MD、LA組Drp-1mRNA分別為(0.99±0.07)、(1.78±0.08)、(1.48±0.09)、(1.44±0.10)、

11、(1.30±0.05)；Bax mRNA分別為(1.09±0.21)、(7.08±0.86)、（4.95±0.83）、（4.52±0.88）、（2.86±0.54）; Bcl-2 mRNA分別為（7.80±0.40）、(2.99±0.64)、（4.06±0.81）、（4.09±0.80）、（5.62±0.83）。
　　結(jié)論：
　　1.糖尿病大鼠持續(xù)高血糖12周后發(fā)展為糖尿病神經(jīng)病變。
　　2.Drp-1表達(dá)增多導(dǎo)致線粒