DNA甲基轉(zhuǎn)移酶在卵巢腫瘤中的異常表達.pdf

1、目的：本項研究主要探討脫氧核糖核酸甲基轉(zhuǎn)移酶(deoxyribonucleic acid methyltransferases,DNMTs)在卵巢腫瘤組織和卵巢正常組織等不同組織中的差異表達,同時運用數(shù)字差異顯示技術(shù)(DDD)尋找卵巢腫瘤中特異性的非編碼RNA(non-coding RNA,ncRNA)。
　　 方法：收集卵巢癌18例(囊腺癌17例,透明細胞癌1例,其中14例已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移),卵巢良性腫瘤13例(其中畸胎瘤3例,卵

2、巢漿液性瘤2例,纖維瘤3例,顆粒細胞瘤1例,其他良性腫瘤4例)和卵巢正常組織7例(卵巢正常組織取自患有子宮肌瘤或良性卵巢腫瘤的臨床上有手術(shù)指征的絕經(jīng)后病人),共收集組織標(biāo)本38例。收集的組織標(biāo)本立即放入液氮凍存,后加入Trizol研磨勻漿,提取總RNA。對上述提取的.RNA進行逆轉(zhuǎn)錄,并應(yīng)用普通PCR技術(shù)對部分組織進行半定量分析。應(yīng)用real-time PCR分別分析上述組織的DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的mRNA的表達水平。

3、為進一步分析在卵巢腫瘤組織中高表達的DNMT1和DN:MT3B是否具有相當(dāng)水平的蛋白表達,應(yīng)用免疫組化技術(shù)分析卵巢正常組織和卵巢腫瘤組織中蛋白表達水平的差異；應(yīng)用數(shù)字差異顯示技術(shù)尋找卵巢腫瘤中特異性表達的ncRNA,并應(yīng)用普通PCR和測序分析進行驗證。
　　 結(jié)果：研究發(fā)現(xiàn)DNMT1、DNMT3A、DNMT3B三種主要的甲基轉(zhuǎn)移酶中DNMT1在卵巢癌中的mRNA表達水平高于卵巢良性腫瘤組織和卵巢正常組織的表達水平(P=0.009

4、2和P=0.0168),在卵巢良性腫瘤組織的表達水平與卵巢正常組織中的表達水平無明顯差異(P=0.7674)；DNMT3B在卵巢癌組織的mRNA表達水平高于卵巢正常組織的表達水平(P=0.0272),而卵巢癌與卵巢良性腫瘤組織以及卵巢良性腫瘤組織與卵巢正常組織之間無顯著性差異(P=0.2073和P=0.0572)。DNMT3A在卵巢癌中的mRNA表達水平與卵巢正常組織及卵巢良性腫瘤組織均無明顯差異(P=0.3227)。免疫組化結(jié)果顯示D

5、NMT1定位在細胞核,在卵巢腫瘤中表達水平高于正常對照組；DNMT3B定位在細胞核和細胞質(zhì),在卵巢癌中表達水平高于卵巢正常組織,這也與我們的定量PCR結(jié)果相一致。我們運用數(shù)字差異顯示技術(shù)尋找到兩條基因Hs.714487和Hs.479728,通過分析發(fā)現(xiàn)其無明顯的閱讀框,因此可能是ncRNA,并用普通PCR和測序分析初步驗證Hs.714487。
　　 結(jié)論：DNMT1甲基轉(zhuǎn)移酶表達水平高低可能與卵巢腫瘤的惡性程度有關(guān),而DNMT3