CathepsinB在P2X7受體激活NALP3中的作用研究.pdf

1、目的：檢測三磷酸腺苷（ATP）及P2X7受體拮抗劑KN-62、組織蛋白酶B拮抗劑CA-074Me處理人單核細胞THP-1后P2X7受體、組織蛋白酶B（CTSB）與NALP3的表達，探討P2X7受體、CTSB及NALP3的相互關(guān)系以及P2X7受體影響NALP3表達的可能機制。
　　方法：
　　(1)常規(guī)培養(yǎng)THP-1單核細胞，MTT法檢測不同濃度ATP處理后細胞的生長情況，選擇模擬炎癥狀態(tài)下細胞反應(yīng)的最適ATP濃度。
　

2、　(2)分別用ATP單獨處理THP-1細胞， P2X7受體拮抗劑KN-62或CTSB拮抗劑CA-074Me和ATP共同處理單核細胞THP-1，用實時定量PCR、流式細胞術(shù)FCM、蛋白印跡法Western blotting分別檢測P2X7受體、CTSB、NALP3基因和蛋白表達的變化，探討P2X7受體影響NALP3表達的可能機制。
　　結(jié)果：
　　(1)ATP作用于THP-1細胞后，細胞的生長受到抑制，模擬炎癥狀態(tài)下細胞反應(yīng)的

3、最適ATP濃度為2mM。
　　（2）用ATP處理后，P2X7、NALP3、CTSB mRNA及蛋白的表達均明顯高于空白對照組。
　?。?）用P2X7受體的拮抗劑KN-62和ATP共同處理細胞后，P2X7受體、NALP3、CTSB mRNA及蛋白的表達較ATP組均顯著下降，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　（4）用CTSB的拮抗劑CA-074Me和ATP共同處理THP-1細胞后，NALP3及CTSB mRNA及蛋白的表達較ATP組均顯

4、著下降，有統(tǒng)計學(xué)意義，P2X7 mRNA及蛋白的表達與ATP組相比無顯著差異。
　　結(jié)論：在2mM的ATP刺激下，P2X7受體、CTSB、NALP3的表達均明顯升高， P2X7的活化引起CTSB、NALP3的表達上調(diào)，而抑制P2X7的表達導(dǎo)致CTSB、NALP3的表達減少，說明P2X7受體對CTSB、NALP3炎癥小體的表達有影響；抑制CTSB的表達會導(dǎo)致NALP3的表達受到抑制，而對P2X7受體的表達幾乎無影響，說明CTSB對N