強(qiáng)直性脊柱炎髖關(guān)節(jié)韌帶基因差異表達(dá)的分析.pdf

1、強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis, AS）是以侵犯中軸關(guān)節(jié)為主的慢性進(jìn)行性、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis, RA）類疾病，主要病變表現(xiàn)軟骨壞死、骨壞死以及關(guān)節(jié)周圍韌帶組織的破壞與骨化。臨床上骶髂關(guān)節(jié)最先受到侵犯，以后向上蔓延至脊柱骨突和脊柱周圍軟組織，晚期發(fā)生脊柱強(qiáng)直和畸形。約31％的患者病變向下蔓延累及髖關(guān)節(jié)，其中91％為雙側(cè)，髖關(guān)節(jié)韌帶發(fā)生骨化造成整個髖關(guān)節(jié)融合，導(dǎo)致髖關(guān)節(jié)功能障礙

2、或喪失，給患者帶來極大的痛苦。由于發(fā)病年齡大多在15-30歲，給患者和家庭造成的負(fù)擔(dān)相當(dāng)長久和沉重。目前強(qiáng)直性脊柱炎病因尚未完全闡明。強(qiáng)直性脊柱炎的治療主要是物理治療，藥物治療，以及腫瘤壞死因子拮抗劑等生物治療手段。此外還有手術(shù)治療，即對于髖關(guān)節(jié)嚴(yán)重病變導(dǎo)致關(guān)節(jié)疼痛及功能障礙的患者可行人工全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)。目前對于抑制強(qiáng)直性脊柱炎病程發(fā)展的治療尚無根本性的特效藥物，只能緩解癥狀，所用藥物和其他一些風(fēng)濕免疫性疾病差別不大。因此對強(qiáng)直性脊椎炎

3、進(jìn)行全基因組學(xué)研究，尤其是針對髖關(guān)節(jié)韌帶骨化的機(jī)制進(jìn)行深入研究，為臨床上早期診斷和有效治療韌帶骨化，具有十分重要的意義。
　　 研究目的：探索與強(qiáng)直性脊柱炎髖關(guān)節(jié)韌帶骨化的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的致病基因，為臨床尋找抑制韌帶骨化的治療靶點(diǎn)，控制疾病病理進(jìn)程提供堅(jiān)實(shí)的前期實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　 研究方法：利用基因芯片技術(shù)篩查正常人和強(qiáng)直性脊柱炎患者髖關(guān)節(jié)韌帶組織差異表達(dá)的基因，結(jié)合生物信息學(xué)分析手段從中選擇5個表達(dá)（與正常對照相比，2

4、個高表達(dá)的基因：B4GALT3和RBP5；3個低表達(dá)的基因：PDLIM3、MFAP5和FLJ90650）顯著差異的基因進(jìn)一步在mRNA和蛋白水平進(jìn)行驗(yàn)證，并進(jìn)而探討其表達(dá)與疾病嚴(yán)重程度之間的相關(guān)性。收集2009-2010年在我科行人工髖關(guān)節(jié)置換術(shù)的7例強(qiáng)直性脊柱炎患者的髖關(guān)節(jié)韌帶作為病例組研究對象，所有患者均符合84年強(qiáng)直性脊柱炎紐約修訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)。另外選取4例因股骨頸骨折在我科行人工髖關(guān)節(jié)置換術(shù)患者（排除其他各種骨關(guān)節(jié)疾?。┑捏y關(guān)節(jié)韌

5、帶作為正常對照組。采用上述韌帶組織標(biāo)本，抽提RNA，利用real-time PCR 檢測其mRNA水平的表達(dá)變化；提取蛋白質(zhì)，用Western Blot 檢測其蛋白水平的表達(dá)變化；同時運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)在組織細(xì)胞水平進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果。
　　 結(jié)果：病例組與正常對照組的基因芯片結(jié)果顯示，在已知功能基因中：P＜0.05時，差異基因434個，其中上調(diào)基因238個，下調(diào)基因196個；P＜0.01時，差異基因43個，其中上調(diào)基因31個

6、，下調(diào)基因12個。實(shí)時熒光定量PCR 結(jié)果表明，B4GALT3基因在病例組的表達(dá)是正常對照組的4.90倍，RBP5基因在病例組的表達(dá)是正常對照組的2.92倍，HLA-B27基因在病例組的表達(dá)是正常對照組的12.81倍，即三者在病例組的表達(dá)均顯著增高。PDLIM3基因在正常對照組的表達(dá)是在病例組的15.05倍，MFAP5基因在正常對照組的表達(dá)是在病例組的12.49倍，F(xiàn)LJ90650基因在正常對照組的表達(dá)是在病例組的6.04倍，三者在病例

7、組的表達(dá)均顯著降低。Western Blot及免疫組化的結(jié)果與實(shí)時熒光定量PCR 結(jié)果相一致。
　　 結(jié)論：多種病因引起強(qiáng)直性脊柱炎病人髖關(guān)節(jié)韌帶骨化。其中，B4GALT3基因刺激韌帶中硫酸角質(zhì)素合成過度增多，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的鈣鹽沉積，F(xiàn)LJ90650基因則通過特異消除某些蛋白導(dǎo)致髖關(guān)節(jié)韌帶異常骨化；編碼肌動蛋白的結(jié)構(gòu)域蛋白，與細(xì)胞骨架有關(guān)的PDLIM3基因，纖微絲相關(guān)糖蛋白的MFAP5基因及視黃醇結(jié)合蛋白類的RBP5基因可能在