膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在生長發(fā)育期鉛暴露致仔鼠鐵穩(wěn)態(tài)失調(diào)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：鉛暴露可影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)不同組織中鐵的含量的變化，鐵對于維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織的發(fā)育、代謝和功能活動至關(guān)重要。而有關(guān)鉛暴露仔鼠不同腦組織中鐵轉(zhuǎn)出蛋白的變化研究還未見報(bào)道。本研究探討鐵轉(zhuǎn)出蛋白在生長發(fā)育期鉛暴露致神經(jīng)損傷的作用，為進(jìn)一步闡明鉛暴露致神經(jīng)損傷的機(jī)制研究提供理論依據(jù)。
　　方法：1實(shí)驗(yàn)動物及分組：20只SD孕鼠隨機(jī)分為對照組和鉛暴露組，每組10只。對照組大鼠飲用0.05％醋酸鈉。鉛暴露組大鼠飲用0.05%醋酸鉛。自懷

2、孕1 d起孕鼠自由飲用直至仔鼠出生21 d。出生第21 d（post-natal day21，PND21）的仔鼠離乳后繼續(xù)給予與母鼠相應(yīng)處理直至出生后42 d。2觀察仔鼠的精神狀況、活動度、飲食、體重變化等一般情況。3應(yīng)用水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測仔鼠學(xué)習(xí)記憶功能。4應(yīng)用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)法檢測仔鼠海馬、皮質(zhì)中鉛、鐵元素的含量。5應(yīng)用ELISA方法檢測仔鼠血清中可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體受體及總鐵結(jié)合力含量以及海馬、皮質(zhì)中鐵蛋白、膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)

3、蛋白（ferroportin1，F(xiàn)PN1)，膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)輔助蛋白(hephaestin，HP),銅藍(lán)蛋白(cerμloplasmin，CP)的含量。6 HE染色觀察PND1、PND21、PND42仔鼠海馬、皮質(zhì)組織病理變化。7 Perl's鐵染色觀察仔鼠皮質(zhì)、海馬組織中鐵的分布。8 Real-time PCR檢測仔鼠 FPN1 mRNA、HP mRNA、CP mRNA表達(dá)變化。統(tǒng)計(jì)分析：所有數(shù)據(jù)錄入Excel數(shù)據(jù)庫，采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)

4、學(xué)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t-test，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，相關(guān)性分析應(yīng)用簡單相關(guān)系數(shù)分析。
　　結(jié)果：
　　1、鉛暴露對不同發(fā)育期仔鼠的損傷情況
　　1）與對照組相比，鉛暴露組PND21、PND42仔鼠逃逸潛伏期延長；穿越平臺次數(shù)下降。2）HE染色結(jié)果顯示鉛暴露組仔鼠海馬、皮質(zhì)神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)量減少，部分神經(jīng)元變性壞死，神經(jīng)元細(xì)胞排列紊亂。3）鉛暴露組PND1、PND21、P

5、ND42仔鼠海馬、皮質(zhì)內(nèi)鉛含量較同期對照組增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2、鉛暴露對仔鼠海馬及皮質(zhì)鐵含量的影響
　　1）在皮質(zhì)中，鉛暴露組PND1、PND21、PND42仔鼠鐵含量分別為（7.231±1.640）μg/g，（34.285±5.671）μg/g和（47.628±8.741）μg/g，是對照組鐵含量的1.42倍，1.25倍，1.30倍。在海馬中，鉛暴露組PND1、PND21、PND42仔鼠鐵含量分

6、別為（64.23±18.24）μg/g，（103.11±21.35）μg/g和（57.70±9.81）μg/g，是對照組鐵含量的1.53倍，1.22倍，1.53倍。2）鉛暴露組 PND1、PND21、PND42仔鼠海馬、皮質(zhì)組織均較正常對照組有大量鐵沉積，并出現(xiàn)聚集現(xiàn)象。3）鉛暴露組PND1、PND21和PND41仔鼠海馬中鐵蛋白含量分別為（6.98±0.88）?g/g，（5.41±1.06）?g/g和（5.28±0.88）?g/g，均

7、高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，鉛暴露后，仔鼠皮質(zhì)及海馬中鐵含量與鉛含量、逃避潛伏期呈正相關(guān)。
　　3、鉛暴露對仔鼠鐵轉(zhuǎn)出蛋白的影響
　　1）鉛暴露組PND1仔鼠海馬膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ferroportin1 FPN1)含量為（4.45±0.82）ng/g，鉛暴露組PND42仔鼠海馬膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白含量為（2.68±0.67）ng/g，均低于對照組，（P＜0.05）。鉛暴露組PND21仔鼠皮質(zhì)膜鐵轉(zhuǎn)

8、運(yùn)蛋白含量為（3.82±0.27） ng/g，低于對照組，（P＜0.05）。Real-time PCR結(jié)果顯示，鉛暴露組PND1、PND21、PND42仔鼠海馬、皮質(zhì)內(nèi)FPN1 mRNA表達(dá)均低于正常對照組。2）鉛暴露組PND42仔鼠海馬膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)輔助蛋白(hephaestin，HP)含量與對照組相比，表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Real-time PCR結(jié)果顯示，在仔鼠海馬內(nèi)，鉛暴露組PND1、PND21、PND42 H

9、P mRNA表達(dá)均低于正常對照組，在仔鼠皮質(zhì)內(nèi)，PND1、PND42 HP mRNA表達(dá)均低于正常對照組。3）鉛暴露組PND1、PND21和PND41仔鼠海馬中銅藍(lán)蛋白(ceruloplasmin，CP)含量分別為（49.05±13.29）ng/g，（45.91±7.52）ng/g，（32.33±8.61）ng/g，與對照組相比，表達(dá)下降，（P＜0.05）。Real-time PCR結(jié)果顯示，鉛暴露組PND1、PND21、PND42仔鼠