活性維生素D3對人腎小球系膜細胞中mTOR-p70s6K表達的影響.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩56頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權,請進行舉報或認領

文檔簡介

1、目的:
  探討mTOR/p70s6K信號通路在人腎小球系膜細胞中的表達;闡明活性維生素D3在腎小球系膜細胞中對mTOR/p70s6K信號通路的調(diào)控作用,為臨床上使用活性維生素D3治療慢性腎臟病提供堅實的理論基礎。
  方法:
  體外培養(yǎng)人腎小球系膜細胞,取傳代培養(yǎng)至3-7代細胞分為4組:正常對照組(加含5%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基),VD3組(加10-8mol/L1,25(OH)2D3),雷帕霉素組(加5μg/mL雷

2、帕霉素),VD3+雷帕霉素組(加10-8mol/L1,25(OH)2D3及5μg/mL雷帕霉素),干預48小時。倒置相差顯微鏡下觀察人腎小球系膜細胞形態(tài)變化及生長狀況,免疫熒光法檢測各組系膜細胞中mTOR、p70s6K蛋白的表達,實時熒光定量PCR法(RQ-PCR)檢測各組系膜細胞中mTOR mRNA、p70s6K mRNA的表達。
  結果:
  (1)各組系膜細胞生長及形態(tài)變化:正常對照組系膜細胞胞體呈長梭形、不規(guī)則星形

3、或樹枝狀,胞核居中,圓形或卵圓形,較清晰;VD3及雷帕霉素組,與正常對照組比較,細胞數(shù)目有所減少,細胞之間的鏈接減少,少數(shù)細胞胞膜皺縮,細胞體積較對照組變小,細胞核濃縮,部分胞漿濃縮甚至出現(xiàn)空泡,部分細胞漂??;VD3+雷帕霉素組,與VD3及雷帕霉素組相比,細胞核數(shù)目明顯減少,胞體長梭形突出或消失。
  (2)免疫熒光檢測各組干預48h后人腎小球系膜細胞中mTOR、p70s6K蛋白的表達,與正常對照組比較,VD3組、雷帕霉素組、VD

4、3+雷帕霉素組系膜細胞中mTOR、p70s6K蛋白表達強度均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與VD3組比較,雷帕霉素組系膜細胞中mTOR、p70s6K蛋白表達強度無明顯降低,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與VD3、雷帕霉素組比較,VD3+雷帕霉素組系膜細胞中mTOR、p70s6K蛋白表達強度均降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
  (3)RQ-PCR檢測各組干預48h后腎小球系膜細胞中mTOR mRNA、p70s

5、6K mRNA的表達:與正常對照組相比,VD3組、雷帕霉素組、VD3+雷帕霉素組系膜細胞中mTOR mRNA的表達顯著降低,p70s6K mRNA表達顯著增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);與VD3組比較,雷帕霉素組系膜細胞中mTOR mRNA、p70s6K mRNA表達無明顯變化,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);與VD3、雷帕霉素組相比,VD3+雷帕霉素組系膜細胞中 mTOR mRNA的表達顯著降低,p70s6K mRNA表達顯

6、著增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
  結論:
  (1)1,25(OH)2D3可顯著抑制人腎小球系膜細胞的增殖;
  (2)mTOR/p70s6K信號通路存在于在人系膜細胞中,1,25(OH)2D3能通過阻滯該通路抑制系膜細胞增殖;
  (3)1,25(OH)2D3可協(xié)同雷帕霉素抑制mTOR/p70s6K信號通路,加強抑制系膜細胞增殖;
  (4)1,25(OH)2D3很可能是通過調(diào)控系膜細胞中相

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論