高糖環(huán)境對(duì)大鼠腎小球系膜細(xì)胞AMPK表達(dá)及活性的影響.pdf

1、目的：腎小球系膜細(xì)胞形態(tài)和功能異常是糖尿病腎病重要的病理基礎(chǔ)。尋找有效措施阻斷、甚至逆轉(zhuǎn)系膜細(xì)胞的功能異常是臨床防治糖尿病腎病的重要策略之一。新近研究發(fā)現(xiàn)，高糖環(huán)境下的腎小球上皮細(xì)胞AMPK活性明顯降低，腎小球上皮細(xì)胞明顯的增生和肥大。而這一機(jī)制是否也參與了糖尿病狀態(tài)下系膜細(xì)胞的增生還不清楚。本實(shí)驗(yàn)觀察高糖環(huán)境下系膜細(xì)胞AMPK表達(dá)和活性的變化，以及這種變化與系膜細(xì)胞增生的關(guān)系；在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用特異性AMPK激活劑AICAR，觀察其是否

2、對(duì)高糖環(huán)境誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞異常具有保護(hù)作用。 方法： 1.高糖環(huán)境的建立：分別采用DMEM低糖與高糖細(xì)胞培養(yǎng)基，其中糖濃度5．6mmol/L為對(duì)照組、濃度為22．0mmol/L為高糖組。 2.實(shí)驗(yàn)分組：對(duì)照組（糖濃度5．6mmol/L），高糖組（糖濃度22．0mmol/L），低濃度AICAR組（高糖+0．5mmol/LAICAR），高濃度AICAR組（高糖+1．0mmol/LAICAR）。 3.系膜細(xì)胞增殖

3、與細(xì)胞周期的檢測(cè)：應(yīng)用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。 4.AMPK表達(dá)和活性測(cè)定：采用RT-PCR方法測(cè)定AMPKα1、α2亞單位mRNA水平；Westernblot方法測(cè)定總AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKa蛋白水平。 結(jié)果： 1.高糖環(huán)境對(duì)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響：MTT顯示，與對(duì)照組相比，高糖組系膜細(xì)胞表現(xiàn)明顯增殖趨勢(shì)；流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，高糖組G1期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)降低，S期的細(xì)

4、胞百分?jǐn)?shù)增高，G2期細(xì)胞百分?jǐn)?shù)降低，三個(gè)時(shí)期都有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，表明高糖環(huán)境促進(jìn)細(xì)胞DNA合成； 2.高糖環(huán)境對(duì)細(xì)胞AMPK表達(dá)和活性的影響：系膜細(xì)胞在高糖濃度下AMPKα1、α2亞單位的mRNA水平均低于對(duì)照組：利用Westernblot方法測(cè)定的總AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKα蛋白水平也低于對(duì)照組；表明，高糖環(huán)境下系膜細(xì)胞AMPK的表達(dá)及活性均受到抑制； 3.AMPK激活劑AICAR對(duì)高糖環(huán)境中細(xì)胞增殖和細(xì)胞

5、周期的影響：MTT顯示，AICAR可以抑制高糖濃度下系膜細(xì)胞的增殖，并且呈現(xiàn)濃度依賴性；流式細(xì)胞學(xué)顯示，AICAR組細(xì)胞S期百分?jǐn)?shù)下降，G1期百分?jǐn)?shù)上調(diào)。表明AICAR可抑制細(xì)胞DNA合成期； 4.AICAR對(duì)高糖環(huán)境中細(xì)胞AMPK表達(dá)和活性的影響：與高糖組相比，AICAR組AMPKα1、α2亞單位的mRNA表達(dá)增強(qiáng)，總AMPKα蛋白水平及磷酸化AMPKα蛋白水平也較高；表明，AICAR可以增強(qiáng)高糖環(huán)境下系膜細(xì)胞AMPK的表達(dá)及