Enniatin B誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌凋亡過程中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　肺癌是當(dāng)今世界癌癥發(fā)病率第一，在我國(guó)，其發(fā)病率與死亡率高居榜首，衛(wèi)生部統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，肺癌已經(jīng)成為中國(guó)惡性腫瘤的第一位死亡原因，成為嚴(yán)重威脅人類健康和生命的一種疾病。按組織學(xué)類型可將肺癌分為小細(xì)胞肺癌(small celllung cancer，SCLC)和非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)兩大類。非小細(xì)胞肺癌約占肺癌總數(shù)的80-85％，與小細(xì)胞癌相比，其癌細(xì)胞生長(zhǎng)分裂較慢，

2、擴(kuò)散轉(zhuǎn)移相對(duì)較晚。近些年，在化療的成效上，非小細(xì)胞肺癌確實(shí)有顯著的進(jìn)步，無論是從腫瘤縮小的局部控制率上(單一藥物反應(yīng)率10-30％，兩種化療藥物治療反應(yīng)率35-45％)，還是從緩和病程進(jìn)展、改善癥狀方面都有所突破，然而在延長(zhǎng)病患存活時(shí)間上，即使配合放射治療、手術(shù)等，仍無明顯進(jìn)展。目前，化療藥物也僅僅在化療初期明顯，可以有效誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，然而其毒副作用明顯，容易產(chǎn)生耐藥性。所以，尋找作用效率高且毒副作用小，能克服耐藥的新型誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡藥物

3、成為當(dāng)今肺癌治療急需解決的主要問題。
　　綜上所述，本課題研究目的在于:以非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞為研究對(duì)象，對(duì)鐮刀菌菌株Enniatin B的體外抗腫瘤活性進(jìn)行研究，進(jìn)而探討其對(duì)體外培養(yǎng)的非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的增殖影響及凋亡的分子機(jī)制，希望通過對(duì)這些研究可以為治療肺癌和開發(fā)新型肺癌藥物提供一定的理論依據(jù)，做出積極的貢獻(xiàn)。
　　方法：
　　1、不同濃度的Enniatin B(1，2，3 umol/L)分別作用于三株

4、非小細(xì)胞肺癌（腺癌A549細(xì)胞）0、24、48、72小時(shí)，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力。
　　2、細(xì)胞凋亡情況的檢測(cè):流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。
　　3、Western blot檢測(cè)Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1、Enniatin B抗凋亡活性檢測(cè)結(jié)果（MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖結(jié)果）
　　Enniatin B對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響:
　　結(jié)果顯示:E

5、nniatin B下調(diào)A549增殖作用，且Enniatin B的濃度越高，作用時(shí)間越長(zhǎng)抑制增殖越明顯，呈現(xiàn)明顯的濃度效應(yīng)和時(shí)間效應(yīng)。
　　2、Enniatin B誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的研究結(jié)果
　　流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率結(jié)果:
　　結(jié)果顯示:通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率發(fā)現(xiàn)，不同濃度的Enniatin B(1，2，3 umol/L)作用于A549細(xì)胞24小時(shí)后，Enniatin B具有較強(qiáng)誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的作用

6、，濃度越高，細(xì)胞凋亡率越高，呈現(xiàn)濃度依賴性。
　　3、Enniatin B誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的相關(guān)分子機(jī)制研究結(jié)果
　　Western blot檢測(cè)Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的表達(dá)變化:
　　結(jié)果表明:在細(xì)胞凋亡過程中，Enniatin B同時(shí)激活了Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9，其中對(duì)Caspase-9的激活程度強(qiáng)于Caspase-3、Caspase-8。