EZH2在非小細胞肺癌順鉑耐藥中的作用及其機制研究.pdf

1、目的:肺癌是目前我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，其中非小細胞肺癌約占85％，化療是其主要的治療手段之一，然而肺癌對化療藥物極易產(chǎn)生耐藥性，肺癌的耐藥是導(dǎo)致化療失敗的主要原因。EZH2引起的表觀遺傳學(xué)改變與多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展和耐藥關(guān)系密切。為了研究EZH2在非小細胞肺癌順鉑耐藥中的作用，本研究將檢測EZH2在人肺腺癌細胞株A549及其順鉑耐藥株A549/DDP中的表達差異，檢測EZH2與順鉑耐藥性、細胞凋亡及細胞周期的關(guān)系，以探討EZ

2、H2在非小細胞肺癌對順鉑耐藥中的作用及其調(diào)控機制。為肺癌耐藥的逆轉(zhuǎn)研究提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)，為肺癌耐藥的治療提供新的靶點。
　　方法:采用Real-time PCR檢測A549和A549/DDP中EZH2、P21、Bad和Puma的mRNA表達差異。采用RNA干擾技術(shù)抑制A549/DDP細胞中的EZH2表達。通過細胞毒性實驗（CCK-8）檢測抑制EZH2表達后A549/DDP細胞耐藥性的改變。Real-time PCR檢測抑制E

3、ZH2表達后A549/DDP細胞中P21、Puma和Bad的表達變化。流式細胞儀檢測抑制EZH2表達后A549/DDP細胞周期的變化。
　　結(jié)果:
　　1．EZH2的mRNA在A549/DDP中呈高表達，其相對表達量為A549的（1.97±0.02）倍，P﹤0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2．A549/DDP中P21、Puma、Bad的mRNA均呈低表達。P21、Puma差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P﹤0.05)，而Bad無統(tǒng)

4、計學(xué)差異（P﹥0.05）。
　　3．抑制EZH2表達后，順鉑對A549/DDP的IC50由（34.57±3.70）μ mol/L降低至（18.91±2.07）μ mol/L，P﹤0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。提示細胞耐藥性發(fā)生逆轉(zhuǎn)。
　　4．抑制EZH2表達后，A549/DDP中P21、Puma、Bad的mRNA表達均上調(diào)，三者均有統(tǒng)計學(xué)差異（P﹤0.05）。說明EZH2對上述基因具有抑制作用。
　　5．抑制A549/D

5、DP細胞EZH2表達后，G0/G1期細胞比例下降，G2/M期細胞增多（P﹤0.05），細胞發(fā)生G2/M期阻滯。
　　結(jié)論:
　　1．A549/DDP中EZH2表達升高，特異性抑制EZH2表達可使其對順鉑的耐藥性下降，提示EZH2參與介導(dǎo)了A549/DDP對順鉑的耐藥。
　　2．抑制EZH2表達后可使A549/DDP中細胞凋亡相關(guān)基因Puma、Bad的表達上調(diào)，表明EZH2可能通過調(diào)控與上述基因相關(guān)的凋亡通路誘導(dǎo)A549