ACA陽性先兆流產與CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的關系及安子合劑干預作用研究.pdf

1、目的:
　　 1.臨床試驗:通過檢測ACA陽性先兆流產患者治療前后外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的比例,觀察安子合劑對ACA陽性先兆流產患者外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的影響,從臨床方面探討ACA陽性先兆流產的免疫病理機制及安子合劑的免疫調節(jié)機理。
　　 2.動物實驗:通過檢測ACA導致妊娠丟失動物模型孕鼠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞比例,觀察安子合劑對ACA導致

2、妊娠丟失動物模型孕鼠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的影響,從實驗方面探討ACA導致妊娠丟失的免疫病理機制及安子合劑的免疫調節(jié)機理。
　　 方法:
　　 1.臨床試驗:①選取27例ACA陽性先兆流產患者及15例正常孕婦為觀察對象,用流式細胞儀檢測兩組外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的比例,比較ACA陽性先兆流產患者治療前與正常孕婦外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞比例的差異。

3、②用流式細胞儀檢測27例ACA陽性先兆流產患者經(jīng)安子合劑治療后外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的比例,觀察治療前后外周血CD4+CD25+FOXP3+Tr-eg細胞比例的變化。③用ELISA法測定安子合劑治療前后ACA定量和定性指標,觀察ACA的變化。④根據(jù)中醫(yī)證候分級量化及評分標準,記錄安子合劑治療前后腹痛、腰酸、陰道出血等先兆流產臨床癥狀的積分變化,評價中醫(yī)證候的改善情況;動態(tài)檢測安子合劑治療期間血清E2、P、β-H

4、CG值及B超檢查孕囊大小、形態(tài)及胎心搏動等的變化,評價胚胎發(fā)育情況。⑤根據(jù)臨床綜合療效評定標準,評價安子合劑的臨床綜合療效。
　　 2.動物實驗:①將動物隨機分為6組:空白對照組、模型組、安子合劑低劑量組、安子合劑中劑量組、安子合劑高劑量組、阿司匹林組。觀察陰道脫落細胞涂片及陰栓,來確定妊娠日。②通過給孕鼠腹腔注射ACA-IgG/NH-IgG,建立動物模型。③用流式細胞儀檢測各組孕鼠外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細

5、胞的比例,比較各組細胞比例的差異。④用ELISA法測定各組孕鼠外周血ACA的滴度,觀察各組ACA滴度的變化。⑤常規(guī)組織病理切片,觀察各組子宮蛻膜、胎盤組織病理變化:免疫組化檢測各組母胎界面上FOXP3、C3、TNF-α、IgG的表達,觀察各組胚胎吸收率及胎鼠發(fā)育情況。
　　 結果:
　　 1.臨床試驗:
　　 1.1.ACA陽性先兆流產患者治療前CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的比例顯著低于正常妊娠對照

6、組(P＜0.01)。
　　 1.2.安子合劑治療后,ACA陽性先兆流產患者外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的比例顯著高于治療前(P＜0.01)。
　　 1.3.安子合劑治療后,27例患者中20例ACA定性指標-ACA陽性的轉陰率達85.00％,7例ACA定量指標-ACA滴度較治療前顯著下降(P＜0.01)。
　　 1.4.安子合劑治療后,27例ACA陽性先兆流產患者,B超植25例可見胎心搏動,21

7、例胎兒成形,保胎的成功率為92.59％。
　　 1.5.安子合劑治療后,先兆流產中醫(yī)證候明顯改善,治愈率33.33％,顯效率33.33％,總有效率88.89％;臨床綜合療效為痊愈率84.00％,好轉率14.81％,總有效率92.59％。
　　 2.動物實驗:
　　 2.1.成功復制了ACA導致妊娠丟失的動物模型。
　　 2.2.模型動物外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的比例較空白對照組顯著

8、下降(P＜0.01);與模型組相比,安子合劑低、中、高劑量組、阿司匹林組均能顯著升高CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的比例(P＜0.01),其中安子合劑低劑量組療效優(yōu)于中、高劑量組和阿司匹林組(P＜0.01)。
　　 2.3.與模型組相比,安子合劑低、中劑量組、阿司匹林組能顯著降低模型動物外周血ACA的滴度(P＜0.01),,安子合劑低劑量組療效優(yōu)于于中劑量組和阿司匹啉組(P＜0.01)。
　　 2.4.安子合

9、劑中、低劑量組及阿司匹林組能明顯改善模型動物母胎界面上免疫復合物的沉積、血栓病灶、壞死區(qū)域等病理變化。
　　 2.5.安子合劑低、中劑量組、阿司匹林組都能增加模型動物母胎界面上FOXP3的表達(P＜0.01),安子臺劑低劑量組優(yōu)于中劑量組和阿司匹林組(P＜0.01)。
　　 2.6.安子合劑低、中、高劑量組、阿司匹林組都能減少模型動物母胎界面上C3、IgG、TNF-α,的沉積(P＜0.05),安子合劑低劑量組療效優(yōu)于中、

10、高劑量組和阿司匹林組(P＜0.01)。
　　 2.7.安子合劑低劑量組、阿司匹林組能顯著降低模型動物胚胎吸收率,顯著增加模型動物胎鼠、胎盤重量(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1.臨床研究表明,ACA陽性先兆流產患者外周血CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的比例低于正常妊娠婦女,存在免疫調節(jié)異常;中藥安子合劑治療ACA陽性先兆流產的作用機理之一與增加CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的比例、

11、調節(jié)妊娠期機體免疫功能有關。
　　 2.實驗研究表明,ACA導致妊娠丟失的病理機制之一是機體免疫調節(jié)細胞-CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞比例的減少,免疫調節(jié)功能紊亂,免疫復合物沉積于母胎界面,引起補體C3過度激活,誘導TNF-α等炎性細胞聚集并活化,引起母胎界面組織損傷,母體對胚胎排斥,導致妊娠丟失。安子合劑ACA導致妊娠丟失的免疫調節(jié)機制是通過增加CD4+CD25+FOXP3+Treg細胞的比例來實現(xiàn)的,其作用的強