FAT10調(diào)控RYR2在AngiotensinⅡ誘導的心肌肥大中的作用.pdf

1、背景與目的：
　　長期血流動力學異常及代謝紊亂均可導致心肌肥厚，包括細胞體積、膠原含量、基因表達和電生理等改變，心肌肥厚增加心力衰竭和心臟性猝死的發(fā)生率。鈣相關的信號通路如蘭尼堿受體2（Ryanodine receptor2,RYR2）及其調(diào)節(jié)蛋白在心肌肥厚中發(fā)揮了關鍵作用。FAT10(The cytokine inducible modifier HLA-F adjacent transcript10,FAT10)是唯一可通過2

2、6S蛋白酶體途徑調(diào)節(jié)底物降解的類泛素蛋白，我們研究發(fā)現(xiàn) FAT10可抑制心肌細胞凋亡。因此，我們提出假設：FAT10是否可通過調(diào)控RYR2抑制心肌肥大。本研究探討FAT10調(diào)控RYR2對血管緊張素II（AngiotensinII,AngII）誘導的心肌肥大的作用。
　　方法：
　　1、用AngII處理原代心肌細胞48h后，通過western blot分析肥大標志物β-肌球蛋白重鏈（myosin, heavy chain7,

3、cardiac muscle, beta, MYH7）和α-輔肌動蛋白1（actinin alpha1，ACTN1）的蛋白表達水平，并通過qRT-PCR分析肥大標志物心房利鈉因子（ atrial natriuretic factor， ANF）、B型利鈉肽（ B-type natriuretic peptide,BNP)的 mRNA表達水平；同時使用甲基羅丹明(Tetramethylrhodamine, TRITC)-鬼筆環(huán)肽標記技術和

4、激光共聚焦顯微鏡技術觀察細胞表面積變化；
　　2、檢測FAT10在AngII誘導的肥大心肌細胞中的蛋白和mRNA表達水平；
　　3、用FAT10的過表達腺病毒轉(zhuǎn)染原代心肌細胞，經(jīng)Western blot和qRT-PCR驗證轉(zhuǎn)染效果。然后用過表達病毒恢復肥大心肌細胞中 FAT10的表達，通過qRT-PCR分析ANF和BNP的mRNA表達水平，并通過western blot檢測RYR2的Ser2814位點的磷酸化水平及MYH7的

5、蛋白表達情況。
　　結果：
　　1、使用AngII處理心肌細胞后，MYH7和ACTN1的蛋白表達升高，ANF和BNP的mRNA表達升高，且細胞表面積顯著大于對照組。
　　2、FAT10在 AngII誘導的肥大心肌細胞中的蛋白和 mRNA表達水平均降低；。
　　3、使用 FAT10過表達腺病毒轉(zhuǎn)染原代心肌細胞，F(xiàn)AT10的蛋白和 mRNA表達上調(diào)。過表達FAT10后，肥大心肌細胞中ANF和BNP的mRNA表達顯著下