1.vegf在心肌肥大中對脂肪酸代謝的調(diào)節(jié)作用研究;2.vegfb對心肌肥大誘導作用的實驗研究

1、山東大學博士學位論文1.VEGF在心肌肥大中對脂肪酸代謝的調(diào)節(jié)作用研究;2.VEGF-B對心肌肥大誘導作用的實驗研究姓名：李清寶申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（心臟外科）指導教師：范全心20090315山東人學博十學位論文目的：1 ．構建心肌肥大模型，培養(yǎng)新生大鼠心肌細胞和H 9 C 2 細胞；2 ．探討肥大心肌V E G F 的表達及其對P P A R l 3 表達、脂肪酸代謝水平的影響。方法：1 ．心肌肥大動物模型的建立：實驗大鼠隨

2、機分為假手術組( n = 8 ) 、手術組( n _ 8 ) 和藥物組( n - 8 ) 。標準大鼠飼料喂養(yǎng)I 周后，手術組實驗大鼠異氟烷麻醉后氣管插管，并持續(xù)氣管吸入異氟烷保持麻醉，仰臥位，腹部切口，在腎上水平7 - 0線打結縮窄腹主動脈；假手術組只是不進行腹主動脈結扎，其他于術操作和于術組一致；藥物組在手術組相同手術操作基礎上自第二天起連續(xù)應用V E G F 抑制劑哌加他尼鈉鈉。1 5 d 后收集實驗大鼠心臟備用。2 ．新生鼠心窒肌

3、細胞的培養(yǎng)：1 ．3 d 大鼠幼鼠麻醉，無菌條件下開胸取出心臟，0 ．0 8 ％胰蛋白酶液消化，用1 0 ％胎牛血清D M E M 培養(yǎng)液制成細胞懸液，置于3 7 0 C含5 ％C 0 2 培養(yǎng)箱中，根據(jù)心肌細胞和非心肌細胞貼壁時間的不同采用差速貼壁培養(yǎng)。細胞隨機分為三組：對照組( n = 1 0 ) 、P E 組( n = 1 0 ) 和實驗組( n = 1 0 ) ，P E●組在細胞培養(yǎng)穩(wěn)定后加苯腎上腺素( P E ，p h e n

4、 y l e p h r i n e ) 培養(yǎng)；實驗組在細胞培養(yǎng)穩(wěn)定后加P E 和哌加他尼鈉鈉培養(yǎng)，之后進行下一步處理：1 ．細胞更換培養(yǎng)液，對照組培養(yǎng)液含【3 H I 亮氨酸，培養(yǎng)2 4 h ；P E 組培養(yǎng)液含P E 和【3 H I 亮氨酸，培養(yǎng)2 4 h ；實驗組培養(yǎng)液含P E 、哌加他尼鈉鈉和【3 H I 亮氨酸，培養(yǎng)2 4 h 。之后用P B S清洗細胞，1 0 ％三氯乙酸處理細胞，沉淀蛋白，用氫氧化鈉溶解蛋白沉淀，閃爍計數(shù)器

5、讀數(shù)測量。2 ．細胞更換培養(yǎng)液，對照組培養(yǎng)液含9 ，1 0 ．【3 H 】棕櫚酸，培養(yǎng)2 4 h ；P E 組培養(yǎng)液含P E 、9 ，1 0 - 【3 H I 棕櫚酸，培養(yǎng)2 4 h ；實驗組培養(yǎng)液含P E 、哌加他尼鈉鈉、9 ，1 0 ．[ 3 H I 棕櫚酸，培養(yǎng)2 4 h ，之后收集測量。3 ．H 9 C 2 細胞的培養(yǎng)：H 9 C 2 細胞按5 0 0 0 ／c m 2 密度接種到培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)基為1 0 ％胎牛血清D M E M

6、 培養(yǎng)液，每2 天換液一次。細胞隨機分為二組：對照組( n = 1 0 ) 、L P S 組( n = 1 0 ) 和實驗組( n _ 1 0 ) ，L P S 組在細胞培養(yǎng)穩(wěn)定后加L P S 培養(yǎng)2 4 h ；實驗組在細胞培養(yǎng)穩(wěn)定后加L P S 和哌加他尼鈉鈉培養(yǎng)2 4 h ，對照組正常換液。4 ．R T ．P C R 法檢測：分別從左室組織提取R N A ，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄反應得到c D N A ，以A P R T 作為參照，通過R T ．