HIF在糖尿病心肌肥大中的作用.pdf

1、目的:
　　在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中研究HIF在糖尿病心肌肥大中的作用。
　　方法:
　　第一步:建立心肌肥大模型:H9C2細(xì)胞在饑餓培養(yǎng)基中培養(yǎng)18小時(shí)后，再用PE100uM培養(yǎng)48小時(shí)，光學(xué)顯微鏡下拍照。第二步:肥大模型建立好后化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)缺氧，參照文獻(xiàn)予DFO100uM48小時(shí)處理細(xì)胞。第三步:分組實(shí)驗(yàn)，以六孔板進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分別在（短期和長(zhǎng)期）高糖（細(xì)胞培養(yǎng)基糖濃度25 mM）和正常糖（細(xì)胞培養(yǎng)基糖濃度5.5 mM）條件下

2、用PE、PE和DFO、PE和DFO和HIF-1a基因沉默組處理細(xì)胞，培養(yǎng)48小時(shí)后提取總蛋白，利用Western Blot檢測(cè)糖酵解相關(guān)的蛋白，如Glut-1、HXK-Ⅱ、Enloase和凋亡相關(guān)蛋白，如Bcl-2、Bax和Caspase3的表達(dá)，同時(shí)在同樣分組的情況下利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:
　　1.苯腎上腺素(PE)可以誘導(dǎo)H9C2心肌細(xì)胞肥大:光學(xué)顯微鏡下正常H9C2心肌細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，細(xì)胞核圓大居中;經(jīng)

3、PE處理48小時(shí)后，心肌細(xì)胞明顯變大，形狀偏圓或橢圓，細(xì)胞質(zhì)明顯膨脹，細(xì)胞核亦可見(jiàn)稍變大。
　　2.HIF-1α有助于緩解心肌細(xì)胞形態(tài)的肥大:在光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn):NG情況下，經(jīng)PE處理的H9C2心肌細(xì)胞輕微肥大，給予DFO誘導(dǎo)HIF-1α的產(chǎn)生，細(xì)胞形態(tài)有所緩和。HG情況下，給予PE心肌細(xì)胞肥大程度比較明顯，給予DFO后心肌細(xì)胞的肥大緩和不明顯。HIF-1α沉默之后基本上心肌細(xì)胞的肥大形態(tài)都沒(méi)有太大變化。
　　3.Weste

4、rn Blot檢測(cè)與糖酵解相關(guān)蛋白的表達(dá):與正常相比，在長(zhǎng)期高糖條件下HIF-1α的降低可引起Glut-1、HXK-2和Enloase的表達(dá)減少。統(tǒng)計(jì)分析高糖條件和正常糖條件下PE和DFO處理組，各蛋白質(zhì)有顯著性差異，P值小于0.05。
　　4.Western Blot檢測(cè)與凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá):與正常相比，在長(zhǎng)期高糖下HIF-1α表達(dá)降低，同時(shí)Bcl-2表達(dá)降低，活化的Caspase3表達(dá)增加。統(tǒng)計(jì)分析高糖條件和正常糖條件下PE和

5、DFO處理組，Bcl-2和caspase3有顯著性差異，P值小于0.05。
　　5.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡:在短期高糖條件下，HIF-1α介導(dǎo)肥大心肌細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論:
　　HIF-1在糖尿病心肌肥大中有作用:HIF-1有助于緩解心肌細(xì)胞的肥大;長(zhǎng)期高糖條件下，HIF-1α的降低可引起肥大心肌細(xì)胞糖酵解相關(guān)蛋白，如Glut-1、HXK-2和Enloase的表達(dá)減少;長(zhǎng)期高糖條件下，可引起肥大心肌細(xì)胞凋亡蛋白Casp